I-Eβ基因与实验性小鼠膜性肾小球肾炎发病相关性与研究.pdfVIP

卜E B基因与实验性小鼠膜性肾小球肾炎发病的相关性研究 摘 要 目的：肾小球肾炎发病机制的研究目前仍停留在体内免疫功能紊乱上， 且发病机制之间尚存在一些相互矛盾之处。本实验拟对控制免疫应答的基因 I-邸片段1进行研究，探讨其与小鼠膜性肾小球 ．Ir基因(immuneresponsegene 肾炎(membranous 基因在肾炎发病中的重要地位和作用，揭示其分子病理学发病机制。方法：1、 复制与鉴定小鼠膜性肾小球肾炎动物模型：按照Border[1l方法，制备阳离子化 bovine 牛血清白蛋白(cationicserum 小鼠30只，20±29，雌雄对半，随机分为实验组和对照组二组，实验组隔日 尾静脉注射C．BSA0．2ml，于注药三周始每周每只检测2次小鼠尿蛋白，四周末 杀检，进行光镜、电镜、免疫荧光染色鉴定。对照组小鼠隔日注射0．2ml磷酸 buffered 盐缓冲溶液(phosphate 转录多聚酶链反应(reverse chain transcriptionpolymerize 方法扩增并鉴定I．EB基因：随机选取上述膜性肾病动物模型实验组和对照组 小鼠，分别作为检测I．EB基因序列的实验组和对照组，取每只小鼠脾脏组织 acid，RNA)， 50mg，充分捣碎，加入Trizol试剂提取总核糖核酸(ribonucleic 经紫外分光光度计测定光密度(optical 算出各组的RNA的浓度与纯度，并用1％琼脂糖凝胶电泳检测RNA分子的完整 性，利用RT．PCR技术和随机引物将总RNA逆转录成反向转录脱氧核糖核酸 deoxvribonucleic (complementary 设计基因特异性引物在PCR仪上进行体外扩增。以小鼠磷酸甘油醛脱氢酶 (gluceraldehydephosphate 计扩增产物内部特异性引物，以测序仪检钡J]PCR产物，得出I．EB基因序列。4、 方法制备阳离子化牛血清白蛋白，小鼠尾静脉注射制备动物模型稳定可靠；2、 RNA电泳图的5S、 18S、 28S l542．Ong／左右。1％琼脂糖凝胶电泳显示u,带条三 型整齐，无明显拖尾及弥散，说明RNA结构完整，无明显降解。3、逆转录PCR 产生，PCR产物电泳与脱氧核糖核酸(deoxvrib伽ucleic 显，杂带较少，可获得清晰序列，其序列在BLAST／z与正常序列对比，结果 例杂峰、杂带突出，无法辨认序列。5、杂合突变分析显示：实验组共测出碱 原理，作出统计推断，实验数据以SPSSll．5forwindows进行处理，结果：实 验组P 突变率高于PCR扩增所致突变率，其原因可能为实验组在实验过程中发生了 照组杂合突变率高于PCR扩增所致突变率，其原因可能为对照组可能在实验 过程中发生了突变。实验组和对照组进行对比，结果进行四格表x2检验，实 for 验数据用SPSSll．5 0．05)，差异有统计学意义。故可认为实验组杂合突变率高于对照组，其原因 可能与膜性肾病的发生有关。7、对9例杂合突变进行分析发现，实验组8例突 变中，有2例杂合突变同时发生在I．EB基因B1外显子第20位碱基上，均为胸腺 对照组该位点无突变发生。进一步对该位点进行分析发现，实验组和对照组 该位点T峰均有降低。测出的16侈t]序列，T峰下的干扰峰中12例均有腺嘌呤 对照组6例，占对照组66．67％。可以看出该位点A碱基干扰峰发生率实验组高 于对照组，由于例数不多，统计上无意义，需要进，。步的研究证实。而9例序 实验组中6例仅有1例有C的出现，发生率为16．