植物生理学实验报告.docVIP

干旱胁迫条件下小麦的生理生化变化 周良雪（09应生A，094120260） 摘要： 在干旱胁迫下对小麦生理生化变化研究表明，在干旱胁迫下，小麦自身的一系列指标 发生相应的改变，主要为大幅度增加。例如，脯氨酸的含量会明显增加以抵抗小麦因干旱而自身水势降低。PPO，POD抗氧化酶含量增加三倍左右，MDA，可溶性糖的含量增加六倍左右，H2O2的含量增加七倍左右，GSH的含量增加四倍左右。小麦幼苗在干旱胁迫条件下，通过一系列的生理生化变化，来抵抗不良环境。 关键词： 干旱胁迫，脯氨酸，PPO，POD，MDA，H2O2，GSH 引言： 世界人口正以惊人的速度增长,预计到2050年底将达到90亿左右。另一方面,由于非生物性胁迫造成了粮食产量的大幅度下降,因此,为了满足日益增长的粮食需求,如何最大限度地减少这些损失已成为所有国家和地区普遍关注的问题。环境胁迫诱发了植物在基因表达和细胞新陈代谢等多方面的变化,最终影响植物生长发育和产量的形成。干旱是作物生长过程中经常遇到的逆境胁迫之一,近年来,由于气候变化导致的干旱灾害呈逐年增加的趋势。小麦是世界性的粮食作物,干旱胁迫严重影响小麦的生长和产量。研究小麦的抗旱生理及分子机制,通过遗传操作增强小麦抗旱性,培育抗旱型小麦品种,对于保障小麦高产稳产具有重大意义。 干旱逆境下植物最明显的生理响应是生长受到抑制 其中50个半粒进行TTC染色（30℃水浴 20 min）， 另50个半粒进行曙红染色（室温染色10 min） ②Pro的提取：min →上清液定容至5 mL。测定：上清液各2 mL →分别加入2 mL冰乙酸和2 mL茚三酮试剂→煮沸20 min→冷却后分别测定A520 0.5 g实验材料→加入少许石英砂和3 ml提取液（50mmol/L PBS, pH5.8,内含0.１mmol/ LEDTA, 1%PVP） → 充分研磨　→转入离心管中→用2 ml提取液洗研钵→ 5000 rpm离心10 min →上清液定容至5 ml →用于测定POD和PPO酶活性或分装后转至-20或-80℃保存POD测定：取POD反应混合液（10　mmol/L5 mmol/L H2O2,用PBS溶解）2.90 ml，25 ℃水浴5 min，加入酶液100 ml（空白调零用提取液取代），立即记时，摇匀，读出反应30 s和3 minPPO测定：取PPO反应混合液（ 20 mmol/L邻苯二酚，用PBS2.8 ml， 25 ℃水浴5 min，加入酶液0.2 ml（空白调零用提取液取代），立即记时，摇匀，读出反应 30 s和2 minA410。 ④MDA提取：取干旱和正常的小麦幼苗各0.5 g →加入3 mL 10%三氯乙酸（TCA）和少许石英砂→充分研磨→用2 mL 10% TCA洗研钵→5000 rpm离心10 min →上清液定容至5 mL。 测定：分别取上清液各2 mL →加入0.6%TBA 2 mL→煮沸15 min→冷却后分别测定A450和A532 ⑤H2O2提取 ：rpm离心10 min →上清液定容至３ mL →取１ mL → ３ mL 萃取剂→ 摇匀→ ３ mL 蒸馏水→ 摇匀→ 5000 rpm离心1 min →上层水相为H2O2 测定：上清液各1 mL →分别加入2 mL工作试剂→30℃水浴20 min→冷却后分别测定A410 ⑥GSH的提取：分别取0.1 g实验组和对照组的胚芽鞘→加入3 mL 5%三氯乙酸（TCA）和少许石英砂→充分研磨→用2 mL 5% TCA洗研钵→ 5000 rpm离心10 min →上清液定容至5 mL。 测定：上清液各1 mL → 分别加入1 mL0.1M PBS (pH=7.7) → 0.5 mL 4 mM DTNB (用0.1M pH6.8PBS现配，空白用此PBS代替) → 25 ℃5 min→测定A412 实验结果： 研究因素 Pro A520 POD A470 （1:30s） PPO A410 （1:30s） 可溶性糖 A450 MDA A532 H2O2 A410 GSH A412 实验组 3.00 1.47 0.099 1.104 0.287 0.548 0.291 对照组 0.126 0.998 0.036 0.181 0.052 0.071 0.083 Pro （实验）= vmol.g-1FW =3÷(3.24×1×0.1) ×6×(5÷2) =138.89 vmol.g-1FW Pro （对照）= vmol.g-1FW =0.126÷(3.24×1×0.1) ×6×(5÷2) =5.83 vmol.g-1FW POD（实验） vmol.g-1FWmin-1