乙型肝炎病毒X蛋白及翻译延长因子1α1(eEF1α1)的相互作用及对其功能的影响.pdfVIP

乙型肝炎病毒X 蛋白与翻译延长因子1a1 （eEF1a1 ） 的相互作用及对其功能的影响 摘 要 持续的乙型肝炎病毒（hepatitis B virus, HBV ）感染可引起急慢性乙型肝 炎，肝硬化,并与原发性肝细胞癌（HCC ）的发生发展关系密切。全球有超过 3 亿的慢性感染人口，HBV 致病的确切分子病理机制仍不清楚。 HBV 为一种部分双链环状嗜肝DNA 病毒，含4 个编码病毒蛋白的开放读 码框（ORF ），其中一个X 基因ORF 编码HBV X 蛋白（HBx ），包含了154 个氨 基酸。HBx 被认为是一个多功能蛋白，在病毒的感染、宿主细胞的凋亡、肝癌 的发生以及参与病毒与宿主细胞相互作用的过程中都起到十分重要的作用。HBx 在参与肿瘤的发生发展过程中所发挥的影响是当前HBV 研究的热点。目前的研 究表明，HBx 的许多生物学功能需通过与其它的蛋白相互作用完成，HBx 蛋白 可以和许多的细胞因子相互作用，其中包括转录调控因子、细胞信号传导因子以 及凋亡相关的蛋白。 鉴于已经发现了种类繁多的HBx 结合蛋白，我们认为可能还存在一些目前 未知的能够和HBx 蛋白相互作用的细胞蛋白。为更深入研究HBx 的功能，本课 题第一部分，我们运用免疫沉淀（Immunoprecipitation ）及随后的基质辅助激光 解吸电离飞行时间质谱鉴定（MALDI-TOF- MS ）的方法筛选获得了五个HBx 相 互作用的肝细胞蛋白，其中一个为真核延长因子1a1（Eukaryotic Elongation Factor 1 alpha 1，eEF1a1 ）。eEF1a1 又称为真核细胞翻译延长因子1a1，是一个重要的 蛋白翻译因子。eEF1a-GTP 催化氨酰tRNA 结合到核糖体的A 位点。eEF1a1 不 仅是翻译必须的蛋白，而且是一个重要的多功能蛋白，参与许多重要的细胞过程 和疾病，包括信号传导、翻译控制、凋亡、细胞骨架组成、病毒复制及癌基因转 化等。 本课题的第二部分，通过 GST pull-down 实验和免疫共沉淀 （Co-Immunoprecipitation,Co-IP ）实验来进一步证实HBx 蛋白与eEF1a1 在细胞 4 外和细胞内存在相互作用。 eEF1a1 的功能包括参与蛋白翻译和促进F-肌动蛋白成束，本课题第三部分 旨在研究HBx 对eEF1a1 相关功能的影响。结果提示HBx 可以通过与eEF1a1 结 合，抑制细胞蛋白的总体翻译水平，减少F-肌动蛋白的成束，提示HBx 通过与 eEF1a1 的相互作用，参与了HBV 的致病性。 关键词：乙型肝炎病毒 乙型肝炎病毒X 蛋白 真核延长因子1a 蛋白翻译 F-肌动蛋白 5 Effects of Hepatitis B X Protein on Eukaryotic Elongation Factor 1 alpha 1 by Protein-Protein Interaction Abstract Persistent hepatitis B virus (HBV) infection is closely associated with the development of the acute and chronic forms of hepatitis, and with cirrhosis and hepatocellular carcinoma (HCC). But the exact molecular mechanism of how the virus inducing these diseases remains unclear. H