模式生物斑马鱼在我国毒理学的研究中的应用.pdfVIP

模式生物斑马鱼在我国毒理学研究中的应用 李文畅 胡人杰 天津市医院科学研究所 300020 斑马鱼(Daniorerio,zebrafish)是一种原产于南亚的热带淡水鱼，属硬骨鱼类，辐鳍纲(A ctinopterygii)，鲤形目(Cyprinidae)，鲤科(Cyprinirdae)，鲐属(Danio)[1]。体长4～6cm， 呈纺锤形。在1994年召开的冷泉港集会以及 《Nature》、 《Science》杂志中提出斑马鱼具备成为 脊椎动物分子发育生物学甚至人类基因组计划模式物种的条件[2、3]，而后2004年无菌斑马鱼的成功 培育[4]，2009年斑马鱼全基因组测序完成[5]，使得斑马鱼最终成为一种公认的新型模式生物，并已 大规模应用于小分子化合物 （药物）筛选以及基因表达等分子生物学方面的研究。 斑马鱼为实验对象的研究中，测定了雷公藤甲素、大黄素、苦参碱三种中药有效成分的毒性【引。实 验采用成体斑马鱼，置于30-50ml溶液瓶中，瓶中液体温度保持在25+l℃，实验分为正常对照、 113．2和1．18x103 性大小排序相一致，证明斑马鱼模型可以用于中药成分毒性的快速筛选和评价。另一项试验来自于 对三唑类杀菌剂的毒理学评价【9】。该类药物系常见的中、低毒性农药污染物，该急性毒性试验采用 气)的鱼缸中，每种农药设置5个浓度梯度，每一个浓度组放置10尾鱼，连续观察96h，记录斑马 鱼死亡数。评价标准分为3级，即有害(3级)、有毒(2级)、剧毒(1级)。它们的毒性大小的 以96h 终，被评价的17种杀菌剂中有害者10种，有毒者7种，未见剧毒者。以斑马鱼作为实验对象观察 农药毒性的试验还见于才冰等人的试验【l们，试验样品包括杀虫剂、杀菌剂、除草剂、植物生长调 节剂等，试验方法参照OECD试验准则和国家环保部颁布的化学农药环境安全评价试验准则，采用 半静态法。毒性级别划分为：低毒LCso10mg／L，中毒1．0mg／LLC50≤10mg／L，高毒O．1mg／L mg／L，剧毒LC50≤0．1 LCso一1．0 mg／L。最终49％的制剂评价为高毒或剧毒。类似的试验还见于对内 吸传导型苯乙酰类除草剂丁草胺毒性的评价【111，研究结果显示丁草胺对斑马鱼作用96h的LC50为 0,951m g／L(95％可信限：O．681—1．313mg／L)，属极高毒类除草剂。 除了以斑马鱼死亡率作为毒性强弱的评价指标外，还可以以此实验为基础进一步了解毒性产生 的机理及其毒性靶器官。例如对飞机草(一种原产于中、南美洲的生物入侵植物)提取物的毒理学 评价【12】。该项研究以飞机草95％7,醇提取物200、500、800 mg／L三种浓度对斑马鱼进行水浴染毒， 21d后取斑马鱼的心和脑制作病理组织切片，显微观察。结果表明，飞机草提取物能够导致斑马鱼 心肌细胞溶解，萎缩乃至坏死，脑组织局灶性炎性细胞浸润、血栓形成及细胞层结构变化，且具量 效关系。确认飞机草提取物对斑马鱼毒性的靶器官在其心脏与脑组织。 2．以斑马鱼胚胎发育为观察指标的毒理学评价 min 斑马鱼鱼卵常年可得，透明度高，发育迅速，特征明显，便于观察，斑马鱼受精卵为圆形，50 左右开始卵裂，以后每15--20 min左右卵裂一次；2．5h后胚胎进入囊胚期，15h后，逐渐发育为幼 鱼。正因如此，斑马鱼特别适用于胚胎发育毒性试验研究。 一项以斑马鱼整体胚胎发育为评价指标的毒理学研究来自于对马钱子碱及生物转化产物马钱子 碱氮氧化物对斑马鱼胚胎毒性差别的观察【l31。该项研究以马钱子碱、马钱子碱氮氧化物培养斑马鱼 6h的受精卵，而后以24、96h的LCso、胚胎孵化率、相对成活率、胚胎细胞凋亡率，细胞周期分 164 为3．73％和0．54％(对照组为0．11％)。实验结论认为马钱子碱的毒性远远高于马钱子碱氮氧化物。 由于马钱子碱氮氧化物系由马钱子炮制后由马钱子碱转化而来，因此该项试验不仅肯定了斑马鱼作 为毒理学研究模型的可用性，也对马钱子通过炮制降低其毒性做出了解释。在前述试验确认丁草胺 属于极高毒类除草剂后…】，对其胚胎毒性做了进一步深入的探讨。