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DPPH·检测法在抗自由基活性研究中的应用 姚慧，林欣荣 上海家化联合股份有限公司，上海200082 自由基和抗氧化剂的研究是近年来非常引人关注的一个研究领域。我国是植物资源大国，植物 种类繁多，还拥有中草药这一宝贵财富，因而研究其中的天然抗氧化剂具有相当的意义。 目前有关自由基的清除剂和抗氧化剂的研究很多，也建立了多种筛选和研究自由基清除剂的方 法和模型。其中，用于测试过程中产生瞬态自由基的体系有：①水溶液体系，即利用Fenton反应 体系产生羟自由基…；②光照体系——光照过氧化氢或光照核黄素／EDTA产生羟自由基”】；③酶体 系——利用黄嘌呤／黄嘌呤氧化酶反应产生超氧阴离子自由基”1等等。测定上述方法产生的瞬态自由 基的方法有比色法[41、ESR自旋捕捉技术和化学发光法等Ⅲ等。 radical)二苯代苦味酰基自由基则是一种稳定的长寿命自 DPPH(2，2一diphenyl—picryl—hydrazyl 由基，由于具有单电子而在517nm处具有强吸收(显深紫色)。当有自由基清除剂存在时，可与 DPPH的单电子配对而使其吸收逐渐消失，其褪色程度与其所接受的电子数成定量关系9】，因而可 用分光光度法进行定量分析，该测定方法简单、可靠，重现性好。利用DPPH法测定抗氧化活性虽 然无法测定瞬态自由基的清除作用，但它可以为我们提供一个样品与稳定自由基反应的信息，因而 该法在国内外被广泛用于自由基清除剂的初步筛选研究工作”．7】。本文利用此方法对一些中草药提取 物的抗氧化活性进行了初步筛选。 I 实验方法与材料 1．1药品与试剂 一二苯代苦味酰基自由基(DPPH·，SIGMA公司)； 维生素C(VitC)，分析纯级；95％乙醇，分析纯级； 蒸馏水。 1 2样品准备 绿茶提取物A、B、C； 红景天提取物A、B； 燕麦提取物； EXSYMOL MONACO； 菊花提取物。 样品分别用二甲亚砜(DMSO)或蒸馏水溶解后制成不同浓度的溶液备用。 1．3 DPPH．清除作用的测定 用95％的乙醇将DPPH配制成60 gmol／L的溶液，样品的测试过程如表1所示。表中A+为阳 清除率按下式计算： A— A． 水涪陛样品：(1一——_二=_-)×100％ 一A A一 ADMSO —K )× 油觥趴卜—}一Ⅸ撕 醚一 100％ A- A- 184 表1． 样品的DPPH．清除反应过程 2．实验结果与讨论 2．1不同植物提取物对DPPH．的清除作用 ∞ 誉 、， 舳 褂 篮 烬 ∞ 剥 衄 ∞ 皿 ● Z 臣 加 0 O 反应终浓度(％) 图1不同样品对DPPH-自由基的清除能力 燕麦、EXSYMOL 示。不同来源的红景天和绿茶提取物的自由基清除能力如图2、3所示。 185