牛脾中RNA提取的工艺.ppt

牛脾中RNA提取的工业化生产 ——生物0801班 刘清泉 邓谭琦 危亚熵 张太亮 王 琨 应用前景 脾脏是机体重要的免疫器官，富含淋巴细胞、浆细胞和巨噬细胞。其RNA无种属特异性，可在不同种属间交叉转移免疫功能。 利用脾脏提取的RNA可作为非特异免疫信息刺激并增强受体的免疫防御能力，并可促使癌细胞逆转。 临床上主要用于治疗免疫功能低下的疾病及呼吸道疾病、肺心病、慢性气管炎、银屑病、荨麻疹，并可作为治疗恶性肿瘤的辅助用药。 生产主要原理 以牛脾为原料，提取活性RNA，利用苯酚法提取，可以选用紫外扫描、凝胶电泳及HPLC对所得的制品进行鉴定及含量测定。 而本生产选用紫外吸收法来进行RNA纯度的检测。 检测采用公式计算： 高效液相色谱法比较： 生产过程 （1）将细胞置于含有十二烷基磺酸钠（Sodium dodecyl sulfate,SDS）的中 ，加等体积水饱和酚，静置一段时间，使形成上层水相和下层酚相。核酸溶于水相，被苯酚变性的蛋白质或者溶于酚相，或者在两相界面处形成凝胶层。 （2）采用的0.15mol/L 缓冲液系统可使大部分RNA-蛋白复合物解离，而DNA-蛋白复合物只有极少部分解离；用酚处理时DNA-蛋白复合物变性，在低温条件下从水相中除去，这样得到的RNA 制品中混杂的DNA-蛋白复合物极少。 （3）用氯仿-异戊醇继续处理RNA 制品，可进一步除去其中少量的蛋白质。最后用乙醇使RNA 从水溶液中沉淀出来。本法得到的RNA 不仅纯度高，而且多呈自然状态，可供继续研究之用。 生产的主要流程 生产所需主要设备 锤式粉碎机 搅拌器 贮藏罐 反应器 温度控制仪 冷冻干燥器 紫外分光光度计 谢谢！ * * * * * * * * * * * * * * * * ? ? RNA-蛋白复合物解离。 破碎细胞 → → DNA-蛋白复合物变性 → 氯仿-异戊醇继续处理 → 沉淀 → 静置分层，取上层水相 → 成 品 RNA 低温处理 十二烷基 磺酸钠、等 体积水饱和酚 0.15mol/L 缓冲液 酚处理 乙醇