细菌基本检验技术(三).ppt

实验一 细菌检验基本技术(三) 目的 掌握观察菌落的方法，了解细菌在液体、半固体培养基的生长表现及意义。 掌握革兰染色法和熟悉细菌涂片的制备。 掌握细菌和基本形态和特殊结构。 【器材】 显微镜、载玻片、察镜纸、小镊子、接种环、酒精灯等 细菌染色标本的制作程序 染色方法 革兰染色法（Gram stain） 芽胞染色法（spore stain） 结果 紫色：革兰阳性菌 芽胞染色法（spore stain） 方法： 涂片→干燥→固定→5%孔雀绿加温染 3～5min →水洗→0.5%沙黄1min→水洗、晾干、油镜检 结果：菌体呈红色，芽胞呈绿色。 影响因素 染色关键：脱色时间的长短 其他影响因素：菌龄、涂片厚薄、染液 质量控制 革兰阳性菌——金黄色葡萄球菌ATCC25923 革兰阴性菌——大肠埃希菌ATCC25922 【注意事项】 1. 每次取菌前后注意将接种环灭菌。 2. 涂片薄而均匀，干燥时注意勿将标本烤枯，不要忘记标本的固定。 3. 革兰氏染色成败的关键是脱色时间，如脱色过度，革兰阳性菌也可被脱色而被误认为是革兰氏阴性菌；如脱色时间过短，革兰氏阴性菌也会被误认为是革兰氏阳性菌。因此必须严格把握脱色时间。 4. 选用培养18~24小时菌龄的细菌为宜，若细菌太老，由于菌体死亡或自溶常使革兰阳性菌转呈阴性反应。 * * 涂 片 干 燥 固 定 染 色 革兰染色法（Gram stain） 方法（改良快速法） 初染： 结晶紫＋等量NaHCO3 3～5s，水洗 媒染： 碱性碘液 3～5s，水洗 脱色： 丙酮酒精 3～5s，水洗 复染： 碱性稀释复红 3～5s，水洗 红色：革兰阴性菌 三、拉丝试验 原理：革兰阴性菌的细胞壁在稀碱溶液中容易破裂，释放出未断裂的DNA螺旋，使菌液呈粘性。 方法： 结果：有丝出现（拉丝试验＋）—— 革兰阴性菌 无丝出现（拉丝试验－）—— 革兰阳性菌 用途：用于快速鉴别革兰阳性菌和革兰阴性菌 *