PCR技术检测猪源沙门氏菌链霉素、卡那霉素耐药基因(aadA、aadB)的研究.pdfVIP

中国畜牧兽医学会家畜传染病学分会成立20周年庆典暨第十次学术研讨会 PCR技术检测猪源沙门氏菌链霉素、卡那霉素 耐药基因(aadA、aadB)的研究 张之文，王红宁，代敏，李春 (四川农业大学动物科技学院，四川雅安，625014) 氨基糖甙类作为一种广谱抗生素，在临床上常用来治疗G。菌感染，由于链霉素、卡那霉素等氨基糖甙 类抗生素的长期在临床上的应用，病原菌对链霉素、卡那霉素产生了广泛的耐药性，在沙门氏菌中，主要 场分离的猪致病性沙门氏菌的链霉素、卡那霉素耐药基因进行检测研究，调查和了解规模化猪场链霉素、 卡那霉素耐药基因的分布和流行情况，建立沙门氏菌对氨基糖甙类代表性药物链霉素、卡那霉素耐药基因 的PCR检测技术。 1．材料与方法 1．1试验菌株：规模化猪场送检的确诊为仔猪副伤寒的典型病猪病料中分离、纯化的菌株，经动物试验和 生化试验鉴定的致病性沙门氏菌16株(四川农业大学动物预防医学生物工程实验室保存)。药敏质控菌 ATCC25922(购自卫生部药品生物制品鉴定所)。 1．2供试药物、培养基：卡那霉素、链霉素、庆大霉素、硫酸新霉素，购自华美生物工程公司，普通营养 琼脂、SS琼脂、LB培养液、LB抗性平板等。 购自上海生物工程公司，引物由上海生物工程公司合成。 门氏菌对链霉素、卡那霉素、庆大霉素及硫酸新霉素的MIC值。 1．5 DNASTAR等软件设计引物。 ATG GTAGGCCAGTCCAC一3’ AT一3’；下游引物：5’一TTT 模板的制备：提取耐链霉素、卡那霉素沙门氏菌的质粒DNA，具体方法参见文献。 反应体系组成：质粒DNA舢1，10uM的上下游引物各2u1；10XPCRbuffer(含25mMMgCl2) 性5min；94℃lrain，54℃1min，72℃1．5rain，共30个循环；72oC延伸8min。 2结果 和庆大霉素的耐药率均为18．75％。 2．2PCR扩增结果 中国畜牧兽医学会家畜传染病学分会成立20周年庆典暨第十次学术研讨会 氏茵的aadA基因进行扩增，结果9株扩出特异性条带。 aadB基因进行扩增，结果7株扩出特异性产物。 3讨论 遍耐药。本研究结果证明，同时耐四种药物的菌株1株，同时耐三种药物的菌株3株，同时耐两种药物的 药和单一耐药等多种形式，在选择药物时，应根据药敏实验结果具体选定。 3．2 Gene 主要参照沙门氏菌中常见的序列，利用Gene 为330bp。 3．3 门氏菌卡那霉素和链霉素耐药基因以质粒上的aadA和aadB为主。 株中是否含有其它耐药基因有待进一步研究。