流式细胞仪分析76 例成人急性粒细胞白血病免疫分型特点.docVIP

流式细胞仪分析76例成人急性粒细胞白血病免疫分型特点 张可珺，帖儒修，陈 伟，邓少丽，陈 鸣 （400042 重庆，第三军医大学大坪医院检验科 ［摘要］ 目的 探讨流式细胞仪在急性粒细胞白血病（AML）免疫分型中的特点和规律。方法 利用流式细胞术中CD45/SSC双参数散点图设门法，四色荧光素（FITC、PE、PC5、ECD）标记的骨髓血细胞免疫表型分析。取初发患者骨髓单细胞悬液100μl加入到测试管中，再加入特定抗体，室温避光1，然后经溶血处理，上机检测。每管均设置同型对照。结果 在76例AML中，髓系相关抗原MPO、CD33、CD65表达最高，总阳性率分别为96.1%、94.7%和93.4%，CD13、CD15、CD16的表达率较低，总阳性率分别为50.0%、63.2%和89.5%；CD14、CD64在M4、M4EO、M5中阳性率最高；CD41、CD61在M7中的阳性率最高；CD34在M1和部分M2中强表达，但总阳性约为46.1%。结论白血病；流式细胞术；免疫分型 陈鸣，电话：023，E-mail：chenming1971@yahoo.c 细胞免疫表型分析从分子水平对血液恶性肿瘤进行分型诊断、预后评估的方法。流式细胞术（flow cytometry, FCM）具有细胞膜及胞内蛋白质[1]。本研究应用CD45/ SSC 设门，用四色荧光通道的检测76例AML分化抗原76例骨髓标本来自第三军医大学医院血液科在2008年1月至2010年3月的患者，其中男性36例，女性40例，年龄为2079岁，中位年龄55岁。1.2 标本标本均按无菌操作规程，取患者髂后上棘位骨髓液3 5 ml (无菌) ,用EDTA-2抗凝，30 min内送检验科1.3 荧光抗体标记 所有单克隆抗体均购自Backman Coulter公司，所有标本均采用四色直接免疫荧光标记法。髓系相关的cMPO、CD33、CD65、CD13、CD15、CD16、CD14、CD64、CD41、CD61、CD71、CD235a系列非相关性的CD34、CD45。抗体组合设计为cMPO-FITC+cCD22-PE+CD45-PC5；②CD65-FITC+CD15-PE+ CD45-PC5；③CD14-ECD+CD33-FITC+CD45-PC5；④CD61-FITC+ CD41-PE+CD45-PC5；⑤CD64-FITC+CD45-PC5；⑥CD13-FITC+ CD45-PC5；⑦CD16-FITC+CD45-PC5；⑧CD235a-FITC+CD71- PE+CD45-PC5；⑨CD38-FITC+CD34-PE+CD45-PC。 1.4 流式细胞仪及试剂 仪器为美国Beckman Coulter公司生产的EPICS XL型流式细胞仪，激光波长为488 nm输出功率200 m检测前先用荧光微球进行常规光路校正及调整荧光补偿。检测时以CD45/ SSC 双参数散点图设门,每测定管收集10 000 个细胞以线性放大器LIN）收集前向角散射光FSC）侧向角散射光SSC）信号以对数放大器(LOG) 收集荧光信号FL1 (530 nm) FL2(585 nm)、FL3 (670 nm)，FL4(675nm)。测量数据和图形输入G4Apple 计算机,应用Cell Quest 程序软件进行信号处理。所有荧光直标(FITC、PE、ECD、PC5) 抗体、破膜剂Reagent\Ⅱ、溶血剂等试剂均购自美国Beckman Coulter公司。 1.5 同型对照的设置本研究中所选用的同型对照为IgG1-PE/IgG1-FITC /IgG1-PC5，即以该种抗体混合物对所分析的骨髓细胞进行标记，排除特异性抗体的非特异性结合调试电压和补偿，将不同抗体的非特异性结合排除为零。 由表1可见，76例AML中，大部分类型中cMPO、CD33和CD65都呈阳性，只有M7时为阴性，该项指标总阳性率依次为96.1%、94.7%和93.4%；其次为CD13、CD15、CD16，这项指标在AML中的阳性率较低，其中CD16的阳性率最高，该项指标总阳性率依次为50.0%、63.2%和89.5%；CD14、CD64在M4、M4EO及M5中都呈阳性，CD64偶尔会在少数M2中阳性表达，由于这型AML较M2少见，因此以上项指标总阳性率有所下降，分别为10.5%和14.5%；CD41、CD61在M7中都呈阳性表达；M6是极为少见AML,其中CD71、cMPO、CD33都呈阳性表达，但CD235a为阴性；CD34只有在M1中阳性表达率最高，而在M2中只有约52%，在其他型中的阳性率更低，其总阳性率约为46.1%FAB 分型 例 数 MPO CD33 CD65 CD15 CD13 CD1