是否存在SSAO同功酶地研究.pdfVIP

B17是否存在SSAO同功酶的研究 王琳肖盛元邓玉林+ 北京理工大学生命科学与技术学院北京100081 SSAO(semicarbazied—sensitiveanline oxidases)是一类对氨基脲敏感的氨基氧化酶的通称， 它能催化胺类物质转换成相应的醛类并产生过氧化氢和氨。越来越多的研究表明，SSAO含量 的变化与糖尿病具有很大的相关性。本实验通过HPLC／MS联用的方法分别检测加入SSAO抑 制剂(2一溴乙胺)后正常鼠、糖尿病鼠和糖尿病治愈鼠血清中SSAO的活性，比较该抑制剂 在各个血清中的抑制率，发现正常鼠血清中的抑制趋势与其他两种血清不同，初步认为糖尿 病鼠中存在着SSAO同功酶，正常鼠一旦患有糖尿病后，其体内的SSAO将发生改变，并且 该改变不可逆。 1实验部分 lrl试剂和仪器 2一溴乙胺和异丙基肾上腺素购自Sigma公司。多巴胺购自Fluka公司。乙腈为色谱纯， 1．2样品收集 Wistar大鼠，雄性，购自北京大学医学部实验动物科学部。随机分成3组，分别为正常组， 糖尿病组和阳性药组。糖尿病组和阳性药组分别通过streptozoein(STZ，50mg／Kg)诱导使其患 有糖尿病，阳性药组再以2一甲双胍进行治疗，使其血糖恢复到正常水平。实验期间大鼠自由 进食，12hlight／dark，20℃。 实验结束后取大鼠尾静脉血，于2500 min，取上层血清做为酶样。 g，4C冷冻离心20 1．3方法 F5．SH柱4．6toni×250mnl，5um，10％(v，v)乙腈，缓冲盐的流动 色谱条件：Discovery uL。 相(pH4．O)，流速0．8ml／min，进样量20 质谱条件：检测器为MS，ESI源，正离子模式，一级质谱做全扫描，扫描范围160～220 L／min。 m／z，提取rrdz170的离子流色谱图。雾化气压力为30psi，干燥气流速为9 1．4SSA0活性的测定 标准甲醛溶液中加入40 6．8)中，37。C rng多巴胺，在400ul的O．05M磷酸盐缓冲液(pH 反应30分钟，PCA终止反应。9mg异丙基肾上腺素做为内标，终体积为50011l。 体外血清反应体系为：25mM甲胺、loul血清、lOmM多巴胺。加抑制剂组先把2一溴乙胺 (1mM)和酶37。C共培养30min，然后再加入底物和衍生化试剂。终止反应后在4C下170009 离心10rain，取上清液过滤进样。 2实验结果 加入酶抑制剂后，各个血清中SSAO活性都有所降低。比较其抑制百分比(见图1)，2 一溴乙胺对正常鼠的抑制率比糖尿病鼠和阳性药鼠略高，由多项式分别表示其抑制趋势，糖 尿病组和阳性药组的趋势线几乎重台，而正常组的曲线与两者不同。 3讨论 众所周知，同一种抑制剂对同一种酶的抑制率是一样的，由多项式曲线可以看出，2一 溴乙胺对糖尿病组和阳性药组老鼠血清中SSAO的抑制趋势几乎相同，而对正常鼠血清中 SSAO的抑制趋势与上述两者不同。由此我们可以假设一旦患有糖尿病后，生物体内的SSAO 会在某种程度上发生改变，并且该改变不可逆，经治愈后仍无法回复到正常状态，即存在SSAO 同功酶。 本实验还在进一步研究中，预期通过大样本多角度的实验深入论证在糖尿病患者中是否 存在SSAO同功酶。若该假设成立，将会对糖尿病的致病机理有了一个新的认识，同时也可 从中寻求治疗糖尿病的新的有效的方法。 图12-溴乙胺对不同鼠血清中ssA0活性的抑制率结果 芷常组培承，糖屎痛组和阳性药组分别通过str*ptozocin(STZ，50 rag／Kg)诱导使其患有糖屎病．阳性药组再以2一甲双胍进行治疗 使其血糖恢复到正常水平。2一溴乙胺为ssAo抑制剂，异丙缎肾上腺素