戊型肝炎病毒嵌合重组蛋白地免疫原性研究.pdfVIP

戊型肝炎病毒嵌合重组蛋白的免疫原性研究 洪艳+，陈勇，扬连华，王怡婷，经络，胡华军 (浙江省医学科学院生物工程研究所，浙江杭』{f310013) [摘要】将含有一段HEV0RF2基因片段(394aa一660aa)和HEV0RF3全基因的表达质粒pHEV23导入大 免疫原性和免疫反应性，从而为进一步研究开发HEV诊断试剂盒及基因工程疫苗提供了基础。 [关键词]戊型肝炎病毒；嵌合：重组蛋白；免疫原性 戊型肝炎是一神由戊型肝炎病毒(HEv)导致的肠道传播的急性传染性肝炎，主要流行于亚洲、非 洲和中美洲等发展中国家，是一种危害严重的世界性传染病。我国是戊肝主要流行区之一，人群感染率 ～20％)，病情凶险，主要威胁青壮年，常引起爆发或流行，给社会带米恐慌和经济损失。【lI此外，该病在我 国急性散发性病毒性肝炎中也占有较高的比例，平均约为8．6％，病死率为2．5％。随着甲型肝炎疫苗的使 用，甲型肝炎的发病率逐年人幅度下降，但与甲型肝炎病毒具有相同的粪一口传播途径的戊型肝炎病毒发 病率却不断攀升，控制该病已刻不容缓。 但由于缺乏有效的病毒体外艮朗培养系统，阻碍了HEV疫苗的研制和诊断试剂盒的开发。用基因工 的ORF2和ORF3的嵌合蛋白，并对其免疫原性进行研究。 1材料和方法 1．1质粒及菌体 ORF2基因片 戊肝病毒嵌合基冈表达质粒pHEV23，由本宽自行构建，该重组质粒携带有一段HEV 1．2试剂及动物 1．3重组蛋白的表达及纯化 L～．379C200 加IPTG至终浓度为O．1mmol 体，进行SDS．PAGELb泳。包涵体用6 用。 1．4重组蛋白的8DS—PAGE和Western—bIot分析 重组蛋白按常规方法进行SDS．PAGE和Western．blot试验。 基金项目：浙江省自然基金青年人才培养资金(RC01054)；浙江省科技厅项目(2004F1lGl36001) +通讯作肯：洪艳，女，副研究员Tel：(0571hz E-mail：bioeng@mail4C11． 266 1．5动物免疫 3周后加强免疫1次。加强免疫后2周、5周后分别断尾取血，取血清测IgG。每组8只小鼠： 1．6鼠血清抗HEVIgG抗体的检测 底物(TMB)显色，在酶标仪450nm波长处测A值，求S／N值，以s小≥2．1为阳性。 1．7 T细胞增殖反应的检测 小鼠加强免疫后5周，每组各取4只小鼠，按常规方法无菌制备实验动物脾细胞，经计数调节细胞 浓度到5x106个，mL，每孔加IOCouL。HEV 2结果 2．1 基因重组戍肝病毒嵌合蛋白的表达及纯化 底分子最大小一致，结果见图l： 1 SDSrecombinant analysis protem Fig ofpurified coilmi由ouIinducedbyllYfG)； I-ProteinmolⅫlarweightmarker；2-pHEV23expressedinE 3-pHEV23expressedinEcoli(inducedbyIPTG)；4-Primarypurifiedrecombinantprotein：5-Purifiedrecombinantprotein 2．2基因重组戊肝病毒嵌合抗原的特异性鉴定 HEV附性病人血清发生特异性反应，在55kD处呈现一条抗原抗体结合带。这一结果表明重组蛋白具有 良好的抗原反应性和特异性。结果见图2： 图2HEV忠省血清与纯化重组蛋白的蛋白印迹结果 2 Western—blotofrecombinant Fig ana