标准氨基酸混合样品的制备.docVIP

标准氨基酸混合样品的制备 (稀释后的标准样品放入冰箱可稳定大约1个月) 方法一 从含有18种标准氨基酸组分（2.5μmol/mL）的混合氨基酸校准混合液中的小玻璃瓶中（味之素株式会社生产，每瓶5.0mL）取出2mL,用0.02N-HCL稀释定容50mL，即为0.10μmol/mL(100nmol/mL)的氨基酸标准液。 方法二 取0.04mL,用0.02mol/L溶液稀释定容1mL。 20μl配制好的氨基酸校准混合液中各种氨基酸的浓度为2nmol。 （100nmol/mL=100nmol/1000μl=0.nmol/1μl） 蛋白质水解分析缓冲液的组成 序号 名称 pH-1 pH-2 pH-3 pH-4 RH-RG 1 容器（缓冲液） B1 B2 B3 B4 B5 2 PH(公称值) 3.3 3.2 4.0 4.9 -- 3 Na浓度（mol/L） 0.16 0.2 0.2 1.2 0.2 4 蒸馏水（大约） 700mL 700mL 700mL 700mL 700mL 5 柠檬酸钠（2H2O） 6.19g 7.74g 13.31g 26.67g -- 6 氢氧化钠 -- -- -- -- 8.00g 7 氯化钠 5.66g 7.07g 3.74g 54.35g -- 8 柠檬酸（H2O） 19.80g 22.00g 12.80g 6.10g -- 9 乙醇 130.0mL 20.0mL 40.0mL -- 100.0mL 10 苯甲醇** -- -- -- 5.0mL -- 11 硫二甘醇*** 5.0mL 5.0mL 5.0mL -- -- 12 聚氧乙烯十二烷基醚（Brij-35*） 4.0mL 4.0mL 4.0mL 4.0mL 4.0mL 13 全量（调节） 1.0L 1.0L 1.0L 1.0L 1.0L 14 辛酸 0.1mL 0.1mL 0.1mL 0.1mL 0.1mL 注* 取25g Brij-35溶于100mL蒸馏水中（需加热） 注** 苯甲醇可不加（易产生乳化现象）。 注*** 硫二甘醇可不加。 注**** B1定容前加入1mol/LNaOH溶液9mL；乙醇25mL； B2定容前加入1mol/LNaOH溶液15mL； B3定容前加入1mol/LNaOH溶液4mL。 R3加入5%色谱乙醇。 注***** C1：水 R3：5%乙醇+水。 注意： 称量这些试剂时，按照组分表用天平或者玻璃量器称取。 制备优良再现性的缓冲液，不需要调节pH值。 缓冲液配好后用φ50mm,0.45μm有机相滤膜过滤（B5用φ50mm,0.45μm水相滤膜）。 茚三酮试剂的组成 容器显示 步骤 试剂 计量 R2 茚三酮缓冲液 1 2 3 4 5 6 蒸馏水 醋酸钠（三水） 冰醋酸 乙二醇甲醚 Total N2鼓泡（沸腾） 336mL 204g 123mL 401mL 1000mL 10分钟以上 R1 茚三酮 1 2 3 4 5 乙二醇甲醚 茚三酮 N2鼓泡，溶解 硼氢化钠 N2鼓泡 979mL 39g 最少5分钟 81*（82.7）mg 最少30分钟 注* 硼氢化钠的纯度为98%。 请不要使用以上指定以外的茚三酮试剂。R1和R2配好后分别用φ50mm,0.45μm有机相滤膜过滤。 《N2气体鼓泡的方法》 （1）往专用容器R1和R2中加入试剂并充分溶解。 （2）连接标注R1和R2的管路，将盖子牢牢拧紧。 （3）用调节器（参照图2-6）调节N2压力到34~40KPa(0.35~0.4kgf/cm2 )。 将N2气转换开关置于BUBBLING位，鼓泡30分钟。 （4）将N2气转换开关扳到ANALY位，确保N2压力为34~40KPa(0.35~0.4kgf/cm2 )。 图7-1表明N2转换开关位置和N2流路系统之间的关系。 ① BUBBLING 制备茚三酮试剂后，通N2鼓泡（N2混合置换）。 ② ANALYSIS 分析时，用N2加压到34~40KPa(0.35~0.4kgf/cm2 )。 ③ OPEN 更换试剂时释放瓶内的N2。 注意： 1.鼓泡时，请不要开放N2钢瓶的总压力（气瓶的主压和次压）。 2.鼓泡时，请不要进行泵送液，否则，由于N2气压力的降低，在泵送液过程中发生错误操作。 柠檬酸三钠 优级纯GR 500g 国药集团化学试剂有限公司 结晶乙酸钠 分析纯AR 500g 上海埃彼化学试剂有限公司 硼氢化钠 分析纯AR 100g 上海埃彼化学试剂有限公司 氯化钠 优级纯GR 500g 国药集团化学试剂有限公司 冰乙酸 优级纯GR 500ml 国药集团化学试剂有限公司 乙二醇甲醚 分析纯AR 50