PVA_TiO2杂化膜制备及其固定化酶稳定性的研究.pdfVIP

维普资讯 第 23卷第 2期 安 徽 工 程 科 技 学 院 学 报 Vo1．23．No．2 2008年 6月 JournalofAnhuiUniversityofTechnologyandScience Jun．．2008 文章编号：1672—2477(2008)02—0007—04 PVA／TiO2杂化膜制备 及其 固定化酶稳定性的研究 杨超英 ，陶玉贵 ，王 强，汤 斌 (安徽工程科技学院生化工程系 。安徽 芜湖 241000) 摘要：以钛酸正丁酯 (TBT)为无机前驱体，采用溶胶凝胶法制备 PVA／TiOz杂化膜．并将其作为载体固定化 过氧化物酶 。探讨了PVA质量分数、pH值，以及 V ：V T 对反应体系稳定性的影响．红外光谱检测分析 表明杂化膜材料有新键形成 ，当掺杂 Ti()z的比为 1％时，杂化膜 的抗张强度有所提高；固定的过氧化物酶贮 存和温度稳定性有所改善 ．且具有 良好 的操作稳定性． 关 键 词 ：聚乙烯醇 ；二氧化钛 ；杂化膜 ；过氧化物酶 中图分类号 ：TQ028．8 文献标识码 ：A 有机无机杂化材料是继单组分材料 、复合材料和梯度材料之后的第四代材料 1【]，因其既有有机材料的 柔性和易修饰性，又有无机材料的刚性及稳定性，成为当今材料科学研究及应用的热点之一 ]．目前，制 备有机无机杂化材料方法有共混法 、原位聚合法 、穿插法 以及溶胶凝胶法等 ]，其中溶胶凝胶法由于能在 较低的温度下形成无机网络 ，易于成型和掺杂 ，从而能够在有机相 中引入无机相的同时又不会 降低其性 能，是 目前研究最广泛的制备技术，用于溶胶凝胶法杂化的无机网络材料主要有 SiO。、TiO。等 4【]． 聚乙烯醇 (PVA)是一种无毒、无害的高聚物 ，它具有 良好的成膜性和力学性能，在纤维 、薄膜 、粘合剂 和生物医学材料等领域具有广泛用途，将其和 SiO。杂化后形成 的PVA／siO。杂化膜力学性能有所提 高L5]．本文利用溶胶凝胶方法 ，探索制备均匀透 明的PVA／TiO。杂化膜的工艺条件 ，并利用该杂化膜对固 定化过氧化物酶稳定性进行了研究，为今后酶电极的制作和医用材料等的开发提供实验依据． 1 实验部分 1．1 试剂 钛酸正丁酯 (TBT)、正丁醇 、戊二醛 259／6水溶液、HC1等均为分析醇；聚乙烯醇 (PVA)：上海化学试剂 公司；辣根过氧化物酶 (HRP)：活力 250U／mg，上海华美生物技术有限公司． 1．2 杂化膜的制备 将钛酸正丁酯(TBT)、正丁醇按一定 比例混合，在搅拌条件下缓慢滴加浓 HC1溶液，使 pH至 2．0以 下，待形成稳定 TBT溶胶后，于快速搅拌的条件下，将一定比例的PVA水溶液缓慢滴入 TBT溶胶中，并 加入适量的戊二醛 ，待体系发生水解缩合反应形成稳定 的凝胶后 ，取一定量倒在干净 的玻璃平板延流制 膜 ，真空干燥制得不同TiO。组分含量的杂化膜． 1．3 固定化酶膜的制备 将杂化膜水洗至中性 ，置于用 0．2mol／L、pH6．5的磷酸盐缓冲溶液 (PBS)稀释至活力单位为 100 U／I的 l0mLHRP液中，于25℃下，振荡(180r／min)处理 2h．取出酶膜 ，用 PBS洗涤，待用．酶膜活性按 文献l-7]方法测定和计算． 1．4 固定化酶膜稳定性的测试 取 0．1g固定化酶膜 ，按测酶活的条件和方法反复进行酶催化试验，并测定其酶活力 ，并以初始酶活 堡 塑!篁堡 试验的酶相对失活率，具体测定酶活方法见文献[8]． 收稿 日期 ：2008—04—29 基金项 目：国家 自然科学基金资助项 目；安徽省教育厅 自然科学基金资助项 目(2002kj069zd) 作者简介 ：杨超英 (196O一)．男 ，安徽芜湖人 ，讲师 ．