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鸭圆环病毒广西株的全基因序列分析及其分子生物学 检测方法的建立 摘 要 鸭圆环病毒(Duck 的病毒，临床症状表现为皮肤和淋巴系统损伤，亦有症状表现为发育 异常和羽毛凌乱。更重要的是可感染鸭的免疫系统，造成病鸭的免疫 抑制。给养鸭业的经济效益带来很大影响。 本研究在鉴定出鸭圆环病毒广西株的基础上，测得鸭圆环病毒全 基因组，与GenBank上公布的鸭圆环病毒全基因序列进行比对，发现 鸭圆环病毒广西株与GenBank上鸭圆环病毒台湾株同源性最最高97％ 以上。与中国大陆各省份、欧洲株、北美株的同源性为76％一79％左右。 目前针对鸭圆环病毒的检测方法主要有传统诊断方法和分子诊 断技术：传统的检测方法结果大部分准确可信，但是检测周期长，操 作繁琐，不利于疾病的快速诊断。目前由于分子生物学技术的飞速发 展，分子技术已经开始应用于鸭圆环病毒的检测。 本研究建立了鸭圆环病毒环介导等温核酸扩增技术(LAMP， isothermal loop．mediated 颖的分子生物学诊断技术。该技术最低可检测到lfg的鸭圆环病毒， 是普通PCR灵敏度的1000倍，与H9亚型禽流感、小鹅瘟、鸭瘟、 鸭肝炎、鸭副黏病毒不发生交叉反应，且用水浴锅l小时内即可完成。 由于该技术具方便快捷、特异敏感等优点，因此可以在很多病原微生 T 物的检测中应用此技术。 Green 此外，本研究还建立了鸭圆环病毒SYBR I荧光定量检测 方法，这也是一种比较新颖的分子生物学诊断技术。灵敏度结果显示 最低可检测到l×102个拷贝的标准品，与H9亚型禽流感、小鹅瘟、鸭 瘟、鸭肝炎病毒不发生交叉反应。实时荧光定量PCR仅需要少量模板， 并且具有快速、简便、灵敏度和特异性好等一系列特点，目前很多病 原微生物的检测应用了这一比较先进的技术。 本研究还建立了鸭圆环病毒和鸭I型肝炎病毒二重PCR检测方 法，这两种病均常见于鸭，流行广泛，传播迅速，发病率和死亡率高， 易混合感染，对水禽危害较为严重，给养鸭业带来巨大的经济损失。 二重PCR是一种特殊的PCR形式，其突出特点是，一次PCR反应能同 时检测并鉴别出两种病原，方便快捷，在临床上具有很高的应用价值。 敏感性结果表明，本研究建立的二重PCR技术与H9亚型禽流感、小鹅 RNA 瘟、鸭瘟、鸭肝炎病毒不发生交叉反应，能同时检出56pg的DHv 模版(569bp)和6pg的DuCV DNA模版(245bp)。 本研究为鸭圆环病毒的诊断和防治提供理论依据和技术支持。 关键词：鸭圆环病毒全基因序列分析环介导等温核酸扩增技术 SYBRGreen I荧光定量PCR二重PCR II ANALYSISOFDUCVIN SEQUENCE GUANGXIAND THE DEVELOPMENTOFTHE MOLECULAR BIOLOGICAL Ⅳ匝THODOF DUCV ABSTRACT DuCVisoneof thenewvirusfound inrecent wasfirst