猪胰岛素样生长因子蛋白3基因多态性的研究.pdfVIP

252堡主旦塾塑堡焦曼登受塞堂星 猪胰岛素样生长因子蛋白3基因多态性研究① 王文君1，2，②费菁1冯继东1李宁1，③ (1．中国农业大学农业生物技术国家重点实验室，北京，100094) (2．江西农业大学食品科学与工程系，南昌，330045) 率分布都存在差异，其中外来猪种AA野生型的基因型频率较高，其中以杜洛克的分布频率最高 100％。但在所检测的猪种中，汉江黑猪的基因型频率和基因频率分布都与外来猪种相近，这还有待于 我们进行深入的研究。 关键词：胰岛素生长因子结合蛋白3基因；多态性；猪 猪生长发育的快慢直接关系到养猪生产者的经济效益。在养猪生产实践巾，提高生产性能是遗传 育种学家不断追求的目标。畜禽的生长发育是一个复杂的生理生化过程，受多因素的影响，如营养、激 素、神经内分泌及品种本身等多方面的调控。但由于受多基因的调控，所以一直以来为研究者所重视， 随着分子生物学的发展和应用，已通过基因组扫描和候选基因策略，分离、克隆和定位了一些与猪生长 发育密切相关的候选基风或数量性状位点。 神经内分泌生长轴是指动物体内从下丘脑、垂体到靶器官由一系列与动物生长发育密切相关的激 素及受体所组成的神经内分泌系统。对于哺乳动物来说，主要包括下丘脑分泌的生长激素释放激素、生 Growth 长抑素，垂体释放的生民激素，靶器官如肝脏分泌的胰岛素样生长因子(Insulin．1ike 和这些激素的受体、结合蛋白(Birlding 受诸多因素的影响。如营养、生理条件、其他激素等。IGFBPs在氨基酸结构上高度保守，总蛋白质中有 J。 50％左右的氨基酸是同源的_1 eta／．， 1989)E2 ①资助项目：国家重火萆础研究发展(“973”计划)( ②作者简介：王文君，男，博士研究生，研究方向：生物化学与分子生物学 cn 猪分子遗传与育种口253 提交GenBank(登录号：AY422045)。猪的IGFBP3蛋白由256个氨基酸所编码。 1材料与方法 1．1动物样本 织块，本地猪种采用血样和耳组织块。血样均为前腔静脉采血，全血裂解带阿冷冻保存，组织样为耳组 织或尾组织采样，置于70％乙醇中带回。 1．2方法 1．2．1样品基因组的提取与纯化 基因组DNA在本实验室利用常规的苯酚／氯仿抽提制备。 1．22引物设计 根据猪IGFBP3基因3012 海生工生物工程有限公司合成。引物序列为PF：5 CAAGCClTrAAAGTGACCA一37。 1．2．3PCR反应条件和反应体系 PCR反应条件为：95℃5 PCR buffer 反应体系为：PeR 2．5一，dN”1．8一，7砷o．2一，前后引物各0．1ttl，DNA模板1fzl，补双蒸水至终 体积。PCR产物经2％琼脂糖凝胶电泳检测后用于SSCP分析。 1．2．4 SSCP分析 SSCP分析采用12％非变性聚丙烯酰胺凝胶进行电泳。电压为120V，电泳16h。电泳完毕后进行 70％乙醇吲定、银染和屁色．最后采用Genesnap软件进行拍照并保存(图1)。 1．25三种基因型的序列分析 对所获得的三种不同基因型进行序列分析(ABI377)，突变序列地图2。 AB BB