猪解耦联蛋白3基因内含子1地遗传变异研究.pdfVIP

猪分子遗传与育种皿347 猪解耦联蛋白3基因内含子1的遗传变异研究① 吴常信lt 李艳华1，3，② 郦汉杰1赵兴波1，2，③李宁2 (1．中国农业大学动物科技学院，北京，loooga) (2．中国农业大学农业生物技术国家重点实验室，北京，lOOOga) (3．北京奶牛中心，北京，100085) I所识别；利用在线分 分析发现长白猪、荣昌猪存在一个碱基突变位点A395G，可被限制性内切酶BstX 结合位点。利用PCR—RFLP分析了中外八个猪种的基因型分布，结果发现五指山猪、香猪、藏猪基因 型分布较为接近，提示我国小型猪可能具有独特的种质特性。该突变位点引起的转录因子结合位点的 变化可能与其他位点协同作用而影响基因的转录效率及调控，可为进一步研究基因的功能提供参考。 关键词：猪；解耦联蛋白3；测序；突变；PCR—RFLP 解耦联蛋白(Uncoupling 最直接影响能量代谢的功能基因，UCP最主要的生理功能是氧化磷酸化的解耦联作用，UCP参与机体 能量代谢，是影响肌肉生长和品质的重要功能基因[“。因此，近年来解耦联蛋白基因为众多遗传学家和 但不同品种问内含子序列是否存在差异目前尚不清楚。本研究通过UCP3基因的内含子t序列的测定 和PCR．RFLP分析，探究UCP3基因在猪的不同能量代谢类型中的表现形式及其遗传特征。 l材料与方法 1．1 实验动物大白猪、民猪、金华猪、五指山猪、香猪、荣昌猪、藏猪、野猪共八个猪种的DNA样品为 本实验室保存，随机抽取20头个体进行检测。 子1，第一对引物序列为：pUCP31F 940C 30s、72℃45s，最后，反应于72℃延伸lOmin。 5min后进行30个循环的94℃30s、660c 1．3 PRISM377 菌株，然后使用ABI DNA测序仪测序。 1．4 U限制性内切酶BstX PCR．RFLP分析在5出PCR产物中加入0．5 4h，酶切产物采用琼脂糖凝胶电泳检测。 ①资助项目：国家自然科学基金项目和霍英东基金项目(91028)资助 ②作者简介：李艳华(1976一)，女，硕十，现工作单位：北京奶牛中心。E—mail：yanhuaH@sohu．唧 edum @通讯作者：赵兴渡(1969一)，男．教授，研究方向：分子遗传学。Tel：OlOE—mail：zhxb@can 348鱼史旦塑婴量焦宣登受窒堂壁 纯化，然后将纯化的PCR产物直接进行测序反应验证酶切结果。 1．6内含子1潜在的调控元件及蛋白结合位点的预测网站 http：／／www．cbrc．ip／researeh／db／TFSEARCH．hmal 2结果与分析 2．1内含子1全序列的获得 依据GenBank上已发表的人(AccessionNo．AF050113)和小鼠(Accession 的保守区序列设计引物，用第一对引物可从猪的基冈组DNA中扩增卅相应的基囚片段。通过克隆、测 sionNoAY739704)。 2．2内含子1的RnP分析 在一个限制性酶切位点，可被BstX 同基冈型的个体数。该基冈在各个猪种中的基因频率和基因型频率见表1。 (：CGCCAC^CCC 罔l intmnl片段BstXI酶团结果和分划 1 RFIP inln,nl Fig naml【u1 fmⅢnt 泳道3，5，6，8：AA；泳道1：BB； Mark