复件 2010-生化习题课（一）氨基酸与蛋白质化学2010-10-07.pptVIP

生物化学习题课（一） 氨 基 酸 与 蛋 白 质 化 学 讲授：袁永泽 2010年10月7日 内 容 提 要 一、蛋白质一级结构测定 二、蛋白质分子量计算 三、氨基酸的化学行为 四、蛋白质高级结构与蛋白质技术 * 设该六肽的氨基酸顺序为：N a-b-c-d-e-f C 根据（1），a = Val (V)； 根据（2），f = Phe (F)； 根据（3），酶水解获得的二肽与三肽都含有Arg（坂口反应阳性） 胰蛋白酶水解碱性氨基酸Arg/Lys羧基末端参与形成的肽键 推测二肽与三肽分别为x-Arg与y-z-Arg； 根据（4），CNBr水解Met羧基末端参与形成的肽键， 形成两个三肽，即c = Met (M)， 两个三肽为：V-b-M, A-e-F。 只剩b, e 未定，由（3），它们都为Arg (R)。 综上，该六肽的氨基酸顺序为： Val-Arg-Met-Ala-Arg-Phe (VRMARF) P112-8 一、蛋白质一级结构测定 习题 P112-9 设该四肽的氨基酸顺序为：N a-b-c-d C 胰蛋白酶水解生成两个片段：1+3或2+2，确定为两个二肽。？ ①没有一个氨基酸同时满足Pauly、坂口反应阳性以及280 nm处有强的光吸收； ②经CNBr处理后释放氨基酸，该片段至少为二肽。 进一步分析上述两个二肽： （1）a-Arg/Lys，由坂口反应阳性，确定为a-Arg； 由Pauly反应阳性、 280 nm处有强的光吸收，确定a = Tyr (Y)； 该二肽为Tyr-Arg (YR)。 （2）c-d 由可被CNBr降解，确定c = Met (M)； 由释放氨基酸的茚三酮反应显黄色，确定d = Pro (P)； 该二肽为Met-Val (MP)。 综上，该四肽的氨基酸顺序为： Tyr-Arg-Met-Val (YRMP) 一、蛋白质一级结构测定 补充例题1 从下列数据推测多肽的氨基酸顺序 组成：Phe, Pro, Glu, Lys2. B. 用Edman试剂处理产生PTH-Glu. C. 用胰蛋白酶、羧肽酶A/B酶解都不产生任何小肽或氨基酸。 一、蛋白质一级结构测定 补充例题1 ＜解 析＞ 该多肽为五肽； B. 多肽的N末端为Glu； C. 胰蛋白酶不能水解该多肽，但该多肽组成中有Lys（而且有两个！） 说明有“-Lys-Pro-”存在；羧肽酶A/B都不能水解C末端氨基酸，说明 C末端氨基酸的N端与Pro连接；由于五肽中只有一个Pro,有两个Lys, 又不能被胰蛋白酶作用，综合这些信息，推断： -Lys-Pro-Lys (C)； 综上，该五肽的氨基酸顺序为： Glu-Phe-Lys-Pro-Lys (EFKPK) 请归纳该题的难点 一、蛋白质一级结构测定 习题 P112-10 ε280 0.1% = 1.5 0.1%: 0.1 g/L 0.1% (W/V): 0.1 g/100 ml n 10.56 95.94 × 1 × 10 - 6 0.375 1.5 × 0.1 10 - 3 × × 50 = 11.36 × 10 3 Dalton × n n 10.56 95.94 × 1 × 10 - 6 0.375 1.5 × 0.1 10 - 2 × × 50 = 113.6 × 10 3 Dalton × n 11.36 KD 113.6 KD m (Protein) n (Protein) = Mr = m (Protein) n (Protein) = Mr = (1) (2) 设每个蛋白分子中含有n个Mo原子（下同） n = 1，蛋白分子量最小。 二、蛋白质分子量计算 习题 P112-3 强酸性阳离子交换柱 洗脱顺序: Asp → Gly → Leu → His 原理： ① 氨基酸荷电与离子交换柱的结合力 对于阳离子交换柱，氨基酸在工作缓冲液中正电荷越强， 与离子交换柱的结合力越大，越难洗脱。 ② 氨基酸侧链R基团与离子交换柱基质的非离子性吸附 包括疏水作用力，范德华力等。 R基团非极性越强，则其与柱基质的吸附力越大， 洗脱相对困难。 三、氨基酸的化学行为 补充例题 2