脆性组氨酸三聚体基因在舌鳞状细胞癌中的表达及意义_药学论文.docVIP

脆性组氨酸三聚体基因在舌鳞状细胞癌中的表达及意义_药学论文 脆性组氨酸三聚体基因在舌鳞状细胞癌中的表达及意义_药学论文 作者：张英怀, 王洁 , 董福生，谷建琦【摘要】 目的 探讨脆性组氨酸三聚体基因在舌鳞状细胞癌中的表达及其意义。方法 应用免疫组化SP法检测30例舌鳞状细胞癌和12例正常舌粘膜鳞状上皮组织中FHIT的表达情况。结果 舌鳞状细胞癌组织中FHIT的阳性率（40.0%）显著低于正常舌粘膜组织（75.0%）（0.05）。FHIT的表达与年龄、性别无关(Pgt;0.05)，而与分化程度相关，分化程度越低，FHIT的失表达越明显(0.05)。结论 FHIT可能在舌癌的发生发展中发挥重要作用。 【关键词】 脆性组氨酸三聚体；免疫组织化学；基因；舌癌 The Expression and Significance of FHIT in Squamous Cell Carcinoma of Tongue Key words：Fragile histidine triad；Immunohistochemistry；Gene； Tongue cancer 舌鳞状细胞癌是口腔颌面部最常见的恶性肿瘤，其恶性程度高，预后差，发病机制仍不清楚。脆性组氨酸三聚体(Fragile histidine triad，FHIT)基因是1996年分离出来的新的候选抑癌基因。许多研究都表明FHIT基因的缺失与众多肿瘤的发生发展密切相关。但FHIT和舌鳞状细胞癌的关系等相关研究国内鲜见报道，国外亦不多见。本研究采用免疫组化方法研究舌鳞状细胞癌中FHIT的表达及意义，探讨FHIT在舌鳞状细胞癌发生中的作用。 1 资料与方法 1.1 资料 收集河北医科大学附属第二医院1991～2004年手术切除的舌鳞状细胞癌石蜡包埋组织标本30例。由2位高年病理医师复查全部病例所有病理切片，按WHO标准核实诊断， 全部病例均为鳞状细胞癌，高分化癌17 例，中分化癌7例，低分化癌6例。30例舌鳞状细胞癌患者中男19例，女11例，年龄28～79岁，平均年龄55.10岁；所有患者术前未经放疗及化疗。 另外，取12例正常舌粘膜组织作为对照，其中男9例，女3例，年龄19～67岁，平均年龄44.17岁。正常组织均取自囊肿等良性肿瘤旁的正常舌粘膜，经病理证实为正常鳞状上皮组织。 1.2 试剂 兔抗人FHIT多克隆抗体浓缩液，使用浓度1∶75, 二抗及SP免疫组化试剂盒，DAB显色剂，多聚赖氨酸防脱片剂均购自北京中山生物技术有限公司。 1.3 对照实验 用已知FHIT阳性的正常乳腺标本作为阳性对照。以PBS代替一抗作为阴性对照。 1.4 实验方法 采用免疫组织化学SP法（过氧化物酶标记的链酶卵白素法）。所有标本均经10%甲醛固定，石蜡重新包埋后，将每个蜡块切为4～5μm的切片，共切3张，1张FHIT染色，1张HE染色，1张作为阴性对照。石蜡切片常规脱蜡至水；3% H2O2甲醇振洗25min，微波抗原修复，92℃～98℃×15min，正常山羊血清封闭，37℃孵育30min，滴加一抗，4℃过夜；滴加生物素化二抗。以上步骤均严格按照试剂盒要求操作。 1.5 结果判定 FHIT阳性结果判定： 以细胞核或浆内出现棕黄色颗粒者为阳性， 结果评定参照Van Heerden[1]标准， 采用半定量积分法， 即对每张切片的染色强度和染色范围分别进行分级计分， 然后根据二者之积确定其阳性强度。 染色强度为无染色或弱染色计为1分， 中等强度计为2分， 强染色计为3分； 染色范围以阳性细胞率计分： ＜10%为1分， 10%～50%为2分， ＞50%为3分。 二者得分计为1～9， ≤3分为不表达或弱表达（－）， ＞3分为中等或高表达（+）。 1.6 统计分析 用SPSS11.5统计软件进行统计分析，免疫组化结果用χ2检验，出现小值频数时，采用Fisher精确概率法。P＜0.05有统计学意义。 2 结果 2.1 FHIT蛋白在正常舌粘膜组织和舌鳞状细胞癌组织中的表达 在正常舌粘膜组织中，FHIT蛋白的表达主要位于基底细胞层和棘层，也有少部分粒层出现FHIT蛋白的表达，呈棕黄色颗粒染色，且大多为强阳性染色，阳性细胞以上皮基底层较为密集，细胞核和细胞浆均有着色。在舌癌组织中FHIT蛋白的表达主要位于癌细胞的胞浆，呈黄色颗粒染色。 FHIT蛋白在舌鳞状细胞癌组织中的中等及高表达率为40.0%，明显低于对照组正常舌粘膜鳞状上皮组织（75.0%，0.05），见表1。 2.2 FHIT蛋白的表达与临床病理学特征的关系 FHIT蛋白的表达与患者的性别、年龄无明显的相关性（Pgt;0.05），而与肿瘤的分化程度相关，分化程度越低，FHIT蛋白的表达缺失越明显（0.05），见表2。表1