苏拉明对体外培养视网膜色素上皮细胞增殖的影响_医学论文.docVIP

苏拉明对体外培养视网膜色素上皮细胞增殖的影响_医学论文 苏拉明对体外培养视网膜色素上皮细胞增殖的影响_医学论文 作者：康军　惠延年　崔志利　韩泉洪 【关键词】细胞培养 关键词:色素上皮，眼细胞培养增殖苏拉明四甲基偶氮唑盐比色法细胞分裂指数AgNORs染色 摘要:目的研究苏拉明（suramin）对培养人视网膜色素上皮细胞（retinalpigmentepithelium，RPE）增殖的影响.方法将不同质量浓度的苏拉明（1.5，15和150mg#12539L-1）加入RPE细胞培养液，采用四甲基偶氮唑盐（tetrazolium，MTT）比色法，细胞分裂指数计数和核仁组成区嗜银染色（AgNORs）检测苏拉明对RPE增殖活力的影响.结果含有100mL#12539L-1小牛血清的培养液可以显著刺激RPE的增殖（0.01），无血清组A值为0.19±0.01、含血清组A值为0.30±0.01苏拉明抑制了100mL#12539L-1血清条件下RPE的增殖，呈剂量依赖性，最大抑制率达51%，3种浓度组A值分别为0.29±0.01，0.24±0.01和0.14±0.01，对细胞的形态无明显影响.结论苏拉明对血清刺激RPE增殖有显著非毒性抑制作用. 　　Keywords:pigmentepitheliumofeyecellcultureprolifera-tionsuraminMTTcelldivisionindexAg-NORs 　　Abstract:AIMToinvestigatetheeffectsofsuraminonpro-liferationofculturedhumanretinalpigmentepithelial（RPE）cellsinvitro.METHODSTheculturedhumanRPEcellswereaddedwithsuramin（1.5，15，150mg#12539L-1）.Tetra-zoliumcolormetricassay（MTT），celldivisionindexand　AgNORsstainingwereperformedtoexaminethecellsviabili-tyofproliferation.RESULTSTheserumstimulatedRPEproliferationsignificantly（0.01）.Theserum-inducedproliferationwaseffectivelyinhibitedbysuramininadose-dependentmanner.Themaximalinhibitionratewasabout51%.TheAvaluewas0.19±0.01and0.30±0.01innon-serumgroupandserumgrouprespectively，andwas0.29±0.01，0.24±0.01，and0.14±0.01attheconcentrationsof1.5，15，and150mg#12539L-1suraminrespectively.Noabnor-malcellularmorphologywasobserved.CONCLUSIONTheserum-inducedproliferationofRPEcanbeinhibitedbysuramin. 　　0引言 　　增殖性玻璃体视网膜病变（proliferativevitreo-retinopathy，PVR）是一种眼内细胞过度增生的病变，视网膜色素上皮细胞（retinalpigmentepitheli-um，RPE）是PVR中主要的增生细胞，因此，寻找有效的辅助药物，抑制RPE的增殖活性，对防止和降低PVR的发生具有重要的临床意义.我们用含有多种促生长物质的小牛血清作为促增殖因素，观察生长因子拮抗剂苏拉明在不同浓度时对RPE增殖的影响. 　　1材料和方法 　　1.1材料人源第3代RPE4种作为实验细胞，由本院王雨生副教授惠赠.Delbecco改良的Eagle培养基（Delbeccon’smodifiedEagle’smedium，DMEM）干粉（Gibco产品）、胰蛋白酶（Difco产品）、新生小牛血清（四季青产品）、苏拉明（suramin）（Alexis，Comerstone，USA）、四甲基偶氮唑盐（美国Sigma公司）、二甲基亚砜（DMSO，上海化学制品厂）、硝酸银（河南焦作市化工三厂）、96孔细胞培养板（NUNC，Denmark）. 　　1.2方法复苏RPE细胞，用含50mL#12539L-1血清的DMEM培养液稀释，37℃，50mL#12539L1CO2孵箱静置培养，次日换液.细胞接近铺满时传代，选4～7代细胞用于