不同地区鸡源大肠杆菌质粒介导的喹诺酮类药物耐药基因调查.pdfVIP

中国兽 医杂志 2011年(第 47卷)第 9期 33 不同地 区鸡源大肠杆菌质粒介导的 喹诺酮类药物耐药基因调查 董剑辉 ，熊惠军 ，宋 立 ，陈 瑞 (1．华南农业大学兽医学院，广东 广州 510642；2．中国兽医药品监察所 ，北京 海淀 100081) 中图分类号：$859．79 9．1 文献标识码 ：B 文章编号：0529—6005(2011)09—0033—02 喹诺酮类药物是兽医临床治疗动物细菌性疾病 20E试条鉴定 ，分别分离到大肠杆菌 76、44、62株 ， 一 类常用抗菌药物 ，此类药物 的广泛应用 ，使动物源 共计 182株。 大肠杆菌对其耐药性也随之逐渐上升l_】]。细菌对喹 1．2 主要试剂 麦康凯培养基、营养琼脂、营养 肉 诺酮类药物的耐药机制主要是染色体介导的靶位改 汤、MH 肉汤由中国兽医药品监察所基础保障室提 变、膜通透性改变和主动外排。近年来 ，质粒介导的 供 ；抗菌药药敏板购 白天津金章科技发展有限公司； 喹诺酮类药物耐药 (plasmidmediatedquinolonere— API20E试条购 自BioMerieux公司 ；DNAMarker sistance，PMQR)基 因qnrA_2，qnrB[、qnrS_4相继 DL一2000购 自TaKaRa公司 ；BtsCI购 自NEB公 出现 ，aac(6)～Ib—cr和 qepA这两种质粒介导 的耐药 司 ；GoTaqGreenMasterMix购 自Promega公司； 基因也被证实_5]。本试验通过微量肉汤稀释法 ，检 大肠杆菌质控菌株 ATCC25922由中国兽 医药品监 测 2009年鸡源大肠杆菌的耐药情况，选择耐喹诺酮 察所提供 。 类药物的菌株 ，采用 PCR方法检测 PMQR基因，以 1．3 耐药性测定 用药敏板进行检测 ，试验方法和 了解 不同地 区鸡源大肠杆菌中PMQR基因的流行 判断标准参考临床与试验标准协会 (CLSI)所推荐 情况 。 的微量肉汤稀释法 。 1．4 引物的设计与合成 根据 GenBank已知 的序 1 材料与方法 列 ，用 Premier5．0分别设计 出5个基 因的特异性 1．1 菌株来源 2009年从福建、广西、天津等地 的 引物 (见表 1)，由Invitrogen公司合成 。 蛋鸡场 ，采泄殖腔拭子 ，用麦康凯培养基分离、API 表 1 PCR引物序列 1．5 PCR扩增 用煮沸法提取 DNA模板。根据 (6)一Ib-cr不能被酶切。扩增 阳性产物均送 Invitrogen 不同的反应条件 PCR扩增 qnrA、qnrB、qnrS、aac 公司测序 ，验证质粒序列 。 (6)一Ib和 qepA基因，对于 aac(6)～Ib的阳性株 ，胶 2 结果与分析 回收后用 BtsCI酶切 ，aac(6)一Ib能被酶切，而 aac 2．1 药敏试验结果 182株鸡源大肠杆菌对 13种 收稿 日期 ：2010—10-20 抗菌药物 的耐药率排序如下 ：四环素 (96．15％)、磺 基金 项 目：“十 一五 ”国家 科 技 支撑 计 划 子 课 题 (2006一 胺异 唑 (92．86 )、复方新诺 明(86．26 )、氨苄 BAK02A03—1)；国家科技支撑计划课