专题1 基因工程 1.1 DNA重组技术的基本工具.docVIP

专题1? 基因工程?? 1.1? DNA重组技术的基本工具 1、基因工程的概念 ?? ⑴、按照人们的愿望，进行严格的设计，并通过体外DNA重组和转基因等技术，赋予生物以新的遗传特性，从而创造出更符合人们需要的生物类型和生物产品。 ?? ⑵、基因工程也叫DNA重组技术。 ?? ⑶、基因工程属于分子生物学领域，是DNA分子水平的操作，是在细胞外环境进行的。 2、实施转基因操作包括哪些基本工作内容？ ?? 对DNA进行“切割”、改造、修饰、“拼接”、转化等。 3、实施转基因操作过程中至少需要哪些工具？ ?? ⑴、限制性核酸内切酶——“DNA分子手术刀” ?? ⑵、DNA连接酶——“DNA分子缝合针” ?? ⑶、基因进入受体细胞的载体——“DNA分子运输车” 4、什么是“限制性核酸内切酶”？ ⑴、概念：是指能够识别DNA分子的某种特定核苷酸序列，并且使每一条链中特定部位的两个核苷酸之间 ??????????? 的磷酸二酯键断开的酶。可以简称“限制酶” ?? ⑵、主要来源：原核生物。约有4000种。 ?? ⑶、特点： ????? ①、主要切割外源DNA分子，对自身DNA不起作用。 ????? ②、只能能识别DNA分子的特定脱氧核苷酸序列 ????? ③、只能在特定的部位进行切割，切割为点一般具有反向重复序列 ?? ⑷、作用实质：催化DNA分子中特定部位的磷酸二酯键同时断开。 ? ?⑸、作用结果：形成平末端和黏性末端。 5、DNA分子经限制酶“切割”后，片段末端有哪些形式？（P-5图1-3） ?? ⑴、平末端：即末端处，DNA双链等长，碱基仍然互补配对。 ?? ⑵、黏性末端：即末端处，DNA双链不等长，其中一条链有几个碱基没有互补配对。 ?? ⑶、EcoRⅠ、SmaⅠ两种限制酶的识别序列都是6个核苷酸。 6、什么是“DNA连接酶”？ ?? ⑴、概念：是能够将两条DNA链同时连接起来的酶。 ?? ⑵、作用：催化形成磷酸二酯键 ?? ⑶、作用特点：两个DNA分子片段之间同时形成磷酸二酯键，连接成为一体。 ?? ⑷、种类： ?????? ①、E.coliDNA连接酶：来源于大肠杆菌，只能连接具有黏性末端的DNA片段。 ?????? ②、T4DNA连接酶：来源于T4噬菌体。既能连接具有黏性末端的DNA片段，也能连接具有平末端的DNA片段。 ???????????但，连接后者的效率较低。 ?? ⑸、作用实质：恢复被限制酶破坏的磷酸二酯键。 ?? ⑹、DNA连接酶与DNA聚合酶的区别 ?????? ①、DNA连接酶能使两个DNA分子片段之间同时形成磷酸二酯键，连接成为一体。 ?????? ②、DNA聚合酶只能使游离的脱氧核苷酸之间形成磷酸二酯键而成为DNA链。 7、什么是“基因进入受体细胞的载体”？ ?? ⑴、概念：指能够将外源基因送入受体细胞的结构。 ?? ⑵、基因载体应具备的条件： ????? ?①、对受体细胞无害，不影响受体细胞正常的生命活动。 ?????? ②、具有标记基因，便于鉴定目的基因是否进入受体细胞。 ?????? ③、能自我复制，通过复制进行基因扩增，保证重组DNA的连续性。 ?????? ④、具有一个或多个限制酶切割位点，便于目的基因的插入。 ?????? ⑤、大小合适，便于操作。 ???⑶、载体种类：细菌质粒、λ噬菌体衍生物、动植物病毒。?其中，最为常用的是细菌质粒。 8、什么是质粒？ ?? 质粒是一种裸露的、结构简单的、独立于细菌拟核DNA之外的具有自我复制能力的小型环状DNA。 9、什么是标记基因？ ?? 标记基因是质粒DNA上控制某种特殊化合物的合成的基因。如四环素抗性基因等。 ?? 标记基因可以作为重组DNA的鉴定和选择的标志。 10、获取目的基因以及载体制作时，要用同一种限制酶进行切割。 11、天然质粒必须经过人工改建后，才能用作基因载体。 专题1? 基因工程?? 1.2? 基因工程的基本操作程序 1、什么是目的基因？ ?? 是指基因工程操作中所需要的外源基因，主要是指编码蛋白质的结构基因。 ?? 如：抗逆性基因、调控基因等 2、什么是基因文库？ ?? ⑴、概念：指储存着某种生物不同基因的受体菌群。 ?? ⑵、特点：分别储存着某种生物的不同基因。 ?? ⑶、获得方法：将含有某种生物不同基因的DNA片段导入受体菌群中。 ?? ⑷、基因组文库：含有某种生物全部基因的基因文库。 ?? ⑸、部分基因文库：含有某种生物部分基因的基因文库。 ??????????cDNA文库：指利用mRNA通过反转录获得的互补DNA片断。 ?? ⑹、构建基因文库的目的和作用： ?? ????目的：为获取大量的目的基因做准备； ?????? 作用：大量储备同种基因。 3、基因、基因文库、目的基因之间有什么区别？ ⑴、基因：是有遗传效应的DNA片段，是