大鼠谷氨酰胺合成酶基因的克隆及其在Hela-G细胞中的表达.pdfVIP

重庆医学 年 月第 卷第 期 ６３６ ２０１１ ３ ４０ ７ ·论 著 · 　　 大鼠谷氨酰胺合成酶基因的克隆及其在 ＨｅｌａＧ 细胞中的表达 １ ２ ３ 孙伟峰 ，刘春兴 ，邹 健 △ 　 （ 南京医科大学附属无锡市人民医院检验 ； 上海市华东疗养院 ； １． ２１４０２３２． ２１４０６５ 　 　 南京医科大学附属无锡市人民医院中心实验室 ） ３． ２１４０２３ 　 摘 要：目的 克隆大鼠谷氨酰胺合成酶（ ）基因，构建其真核表达载体，并观察其在 细胞中的表达。方法 采用 ＧＳ ＨｅｌａＧ 　　 　 　 　 方法，以大鼠大脑皮层总 为模板，扩增 基因，定向克隆到 ＥＧＦＰＮ３载体中。 以 ＴＭ 试剂转 ＲＴＰＣＲ ＲＮＡ ＧＳ ｐ Ｌｉｏｆｅｃｔａｍｉｎｅ ２０００ ｐ 染 表达载体至 细胞中进行瞬时真核表达。以免疫细胞化学方法鉴定 的表达。结果 从大鼠大脑皮层 ＥＧＦＰＮ３ＧＳ ＨｅｌａＧ ＧＳ ｐ 　 组织中克隆到序列正确的 全长编码序列。所构建的 质粒在 细胞中获得高效表达。结论 大鼠 基 ＧＳ ＥＧＦＰＮ３ＧＳ ＨｅｌａＧ ＧＳ ｐ 　 因的克隆、真核表达载体的构建及在 ＨｅｌａＧ 中的表达获得成功。 关键词：谷氨酰胺连接酶；克隆，生物；真核表达 ： ／ 文献标识码： 文章编号： （ ） ｄｏｉ１０．３９６９ ．ｉｓｓｎ．１６７１８３４８．２０１１．