采用毛细管电泳方法以凝血酶为靶筛选天然药物提取化合物.pdfVIP

Vol. 28 高 等 学 校 化 学 学报 No. 2 2 0 0 7 年2 月 CHEMICAL JOURNAL OF CHINESE UNIVERSITIES 234 ~ 237 采用毛细管电泳方法以凝血酶为靶 筛选天然药物提取化合物 l l 2 2 2 2 2 ，3 3 凌笑梅 ，刘 一 ，赖先银 ，张 媛 ，刘晓明 ，屠鹏飞 ，赵玉英 ，崔景荣 （l. 北京大学药学院药物分析教研室，2 . 药学院天然药物化学系， 3. 医学部天然药物及仿生药物国家重点实验室，北京 l00083 ） 摘要 采用毛细管电泳（CE ）法研究了凝血酶和水蛭素及肝素间的相互作用，并测定了凝血酶和水蛭素的结 合常数. 选择凝血酶为靶点，建立了快速灵敏的从天然植物提取物中筛选出先导化合物的CE 方法. 在接近 生理环境的水溶液条件下，研究了两色金鸡菊、肉苁蓉和黄蜀葵中天然植物提取物与凝血酶之间的相互作 用；与阴性对照和阳性对照相比，从ll 个天然化合物中快速筛选出与凝血酶有相互作用的6 个化合物，提 高了天然植物提取物药理活性筛选的效率. 关键词 毛细管电泳；凝血酶；生物分子间相互作用；药物筛选 中图分类号 O657 文献标识码 A 文章编号 025l-0790 （2007 ）02-0234-04 大多数生物分子在发挥其生理功能时均会与其目标分子发生特异性相互作用，因此对生物分子及 其功能配体相互作用的表征已成为生物化学研究的重点之一，这有助于深入认识生物大分子间各种功 能的结构基础及作用机制，并有助于新药的发现. 目前开发的一些临床新药就是建立在对药物-受体相 互作用研究的基础之上［l ~ 3 ］，因此，研究生物分子间相互作用的方法至关重要. 后基因组时代各种功 能基因以及编码蛋白的发现不断为新药研究提供新的靶点. 毛细管电泳方法具有样品消耗量小、速度 快、柱效高以及所用溶液体系非常接近生物体液组成等特点，能得到较为真实的生物分子相互作用信 息，可被用于生物活性物质如蛋白质、核酸及糖类等与药物分子之间的相互作用的研究，是一种非常 具有潜力的药物先导化合物的高效筛选工具. 目前，采用毛细管电泳（CE ）研究生物分子间相互作用的报道较多，但仅有很少几篇是采用CE 从 肽库中筛选小肽的文献报道［4 ~ 6 ］，而有关用CE 以生物大分子为靶筛选药物小分子的研究目前尚未见 报道. 人体血液凝固过程基本上是一系列蛋白质有限水解的过程，大体分为3 个阶段，即凝血因子 被 ! 激活成有活性的 ，因子 （凝血酶原因子）被激活成 （凝血酶），因子 （纤维蛋白原）转变为 ! # # a a a ［7 ］ （纤维蛋白） . ［7 ］ 凝血过程的关键是凝血酶 ，其分子量为38000 ，属于丝氨酸蛋白酶，凝血酶原在人体内可通过 内源性和外源性两条途径被激活，激活后它可催化纤维蛋白原的分解，使每一分子纤维蛋白原从N-端 脱下四段小肽，转变成为纤维蛋白原单体，然后相互联结，特别在因子$ （激活的纤维蛋白稳定因子） a 的作用下形成