SOD和Env的靶向给药的研究.pdf

摘 要 癌症是危害人类健康的重大疾病之一，目前全世界患癌症人口约1500万，我国每年患癌死亡人数 约140万。我国居民每死亡5人中，即有1人死于癌症。在国内，癌症已成为健康的重大杀手。在全 球，艾滋病已超过癌症成为当前人类的最大敌人。几十年来全世界投入了无尽的人力和物力，但尚未 能研制出有效的艾滋病疫苗i人类克服了麻疹、天花、流感，却在艾滋病疫苗研究上举步维艰，甚至 首次对科学产生了动摇。 在相当长一段时间内，癌症和艾滋病还将和人类共存，威胁着人类的生存和健康。人类一方面努 力研究这两种疾病的生物特征，一方面据此设计具针对性的药物。试图攻克这两大疾病。比如，具肿 dismutase，SOD)和能诱导艾滋病中和抗 瘤细胞氧自由基清除能力的超氧化物歧化酶(Superoxide virus immune envelopglycoprotein， 体的免疫原(人类免疫缺陷病毒包膜糖蛋白，Human deficiency Env)。我们的研究主要集中在这两个生物大分子的改造和体内外靶向投递上，特别是对SOD的改造上。 min， 功效报道甚少；其产业化制备，临床应用均未起步。然而，临床上Cu／Zn—SOD的体内半衰期仅为7 肿瘤临床应用还存在诸多其它限制：如无肿瘤细胞定位能力和低细胞穿透能力；而且目前对SOD的抗肿 Reactive 瘤功效争论不一，存在这些争论的原因是SOD的底物(活性氧， oxygen 生物体内角色多样，功能复杂。我们对Fe-SOD的研究改造即基于以上2个应用缺陷与1个争论展开。第 进行单抗融合，实现了对肺肿瘤细胞的高效透膜和靶向杀伤，并揭示了相关的信号转导通路；第四章 在单细胞水平上向读者展示了SoD底物(ROS)在肿瘤细胞中的多重角色，以及角色发挥的机制；第五 章则为Fe-SOD的产业化制备、临床研究，确立了其临床上的抗氧化效果。 诱导具广泛中和效果的抗人类免疫缺陷病毒抗体(即艾滋病疫苗)仍然是目前艾滋病研究领域， 甚至是科学研究领域最顶尖的难点。中和抗体诱导失败的原因很复杂，一则HIV病毒表面存在各种非 功能性Env免疫原，它们大量诱导出非中和性抗体；二则HIV能快速进化出各种亚型，目前很少有抗 体能广泛中和各种亚型HIV。最后一章中我们制备了单一的功能性Env三聚体，并应用脂质体靶向策略 对其进行免疫器官的靶向投递，在体内成功诱导了具广泛中和效果的HIV抗体。 研究的内容、结论和主要创新点如下： 一、Fe-SOD的克隆表达及体内外靶向投递 研究制备了一种既能在体外透膜，又能在体内有效靶向到目标器官的荧光纳米脂质体。 研究克隆了完整的念珠藻re-sod基因(Accession nm)， 程菌pET-SOD(表达量达78％)。研究还设计了一种双重荧光标记的磁靶向纳米脂质体(‘100 并确立了SOD靶向脂质体的体内外给药模型：体外透膜投递中，此纳米脂质体主要以内吞方式投递SOD 到细胞内部；透膜后SOD从脂质体中释放，进而降低细胞氧化压力：在体内靶向投递中，小尺寸的脂质 体更容易进入代谢循环，而共包裹的磁粒子则有效将SOD靶向至小鼠目标组织。 限制问题。具靶向效果的荧光磁纳米脂质体的制备、以及Fe—SOD的体内靶向投递均属国内外首次。 二、肺腺癌靶向性SOD的克隆、靶向投递及抗肿瘤机理分析 研究利用基因工程技术制备了具肿瘤靶向杀伤能力的融合SOD。 合特异性的同时具有较小的分子量，易于到达靶组织。研究从分泌抗肺腺癌单克隆抗体的LC一1细胞系 通路，实现了对SPC—A-1肺腺癌细胞的靶向杀伤。 研究同时克服了临床上SOD无肿瘤细胞趋向性和难于进入实体瘤的两大局限；单链抗体对大分子 的靶向研究为靶向领域先行者；SOD引发的Akt／P27¨町信号通路属国内外首