锂-匹鲁卡品致痫大鼠杏仁核神经元损伤机制的实验研究_医学论文.docVIP

锂-匹鲁卡品致痫大鼠杏仁核神经元损伤机制的实验研究_医学论文 锂-匹鲁卡品致痫大鼠杏仁核神经元损伤机制的实验研究_医学论文 作者：梁决寅 孙建英 冯延秋 杨忠 【关键词】 锂-匹 【摘要】目的 观察锂-匹鲁卡品（LPC）致痫大鼠杏仁核神经元损伤的形态学改变，并检测细胞凋亡相关的DNA碎片标志物。方法用LPC诱发大鼠癫痫持续状态(status epilepticus，SE)3 h，于癫痫中止后第24小时和第48小时处死动物。一组鼠用于制作脑切片，分别用光镜和电镜观察；另一组从相同的脑区提取DNA，在含有溴乙锭的琼脂糖凝胶上电泳。注射了生理盐水的大鼠被用作阴性对照。结果在第24小时和第48小时两个时点，SE 大鼠杏仁核神经元出现了形态学上的坏死和梯状DNA电泳带，对照组未见到坏死及凋亡细胞。结论癫痫持续状态后，形态学上表现为坏死的神经元出现梯状DNA电泳带，提示在此模型中可能存在程序性细胞死亡的机制。 【关键词】癫痫持续状态；凋亡；坏死；DNA梯状电泳带 【Abstract 】Objective To observe the morphology of neuronal death in nucleus amygdalae of rats after status epilepticus(SE) induced by lithium-pilocarpine(LPC), and correlate this with markers of DNA fragmentation that has been associated with cellular apoptosis. MethodsSE was induced for 3 hours with LPC.24 or 48 hours later the rats were killed.One group had brain sections stained， then examined by light and electron microscopy . DNA was extracted from the same area and electrophoresed on an agarose gel with ethidium bromide . The same rats injected with saline were used as negative controls .Results24 and 48 hours after SE，we saw morphologically necrotic neurons in nucleus amygdalae,as well as DNA ladder.Neither apoptotic nor necrotic neurons were seen in rats injected with saline. Conclusion After SE, DNA ladder was seen in nucleus amygdalae where neurons were morphologically necrotic, which suggests that programmed cell death mechanisms may be activated in this SE model. 【Key words】status epilepticus, apoptosis, necrosis, DNA ladder 癫痫持续状态(SE)可导致神经元死亡,尤其是边缘系统。曾有人认为痫性发作诱导的神经元死亡是凋亡，主要依据有TUNEL染色阳性和DNA梯状电泳带，然而，从目前所能得到的超微结构资料来看，SE后神经元的损伤以坏死为主［１，２］。因此，我们精确观察SE诱导的大鼠杏仁核神经元损伤超微形态学改变，并同时观测SE后杏仁核区DNA梯状电泳带，这对探讨SE后脑损伤的机制将提供最直接的证据。本研究还将进一步探讨DNA梯状电泳带在SE后神经元损伤中的意义。 1 材料和方法 1．1癫痫持续状态模型的建立健康成年雄性Wistar鼠40只，3~4月龄，体重250~300 g（由山东大学动物实验中心提供）。笼养，自由进水、进食，室温保持在18~25℃。将大鼠随机分为两组：锂-匹鲁卡品组(A组)和生理盐水组(B组)，再分别进一步随机分为A1、A2组及B1、B2组；其中A1、B1 为24 h处理组，A2 、B2为48 h处理组。参照文献［３］将各组大鼠用苯巴比妥（45 mg/kg）和氯胺酮（25 mg/kg）麻醉（均采用腹腔注射），并同时在颅骨上于无菌操作下置入4根不锈钢电极，置入电极后第3天分别记录各组鼠的基础脑电