应用红外光谱研究三七总皂甙和BSA的相互作用.pdfVIP

B1-13 应用红外光谱研究三七总皂甙与BSA的相互作用 刘嫒谢孟峡’康娟 北京师范大学分析测试中心，北京，100875 研究中药有效成分与蛋白质的相互作用，国内过去通常采用荧光光谱和紫外光谱等方法”。’．红外 光谱适用于不同状态、不同浓度、不同环境中蛋白质和多肽样品的测定【3l’红外光谱实验技术的发展t 为研究蛋白质及多肽结构与功能的关系提供了更为有力的手段【4】，使得该方法具有更加广泛的适应性和 A)等的相互作用p’7J。但是应用红外光谱研究中 紫杉醇等与人血清白蛋白(HSA)、核糖核酸酶A(Rnase 药有效成分与蛋白质的相互作用目前国内外尚属空白。血清白蛋白是一种重要的运输蛋白。在紫外光的 激发下具有较强的内源荧光发射，因此受到了广泛的重视pJ。以血清白蛋白作为模型蛋白，运用红外光 谱研究其与中药有效成分的相互作用对于了解中药有效成分的转运和代谢、蛋白质结构与功能的关系等 具有重要意义，同时也可以为研究其他蛋白质与中药有效成分的相互作用提供～种崭新的实验方法。 I、实验部分 1．1、仪器 Nexus 1．2、实验方法 1．2f1，三七总皂甙的提取方法 三七水提液经过D101型大孔树脂柱提取得到三七总皂甙。 1．2．2、红外光謦嗣定 OMNIC 5．2数据处理软件自动进行水汽校正；室温敞开状态收集背景，然后将样品均匀地铺满ATR 的ZeSe晶片。4cm。分辨率，扫描512次收集样品光谱。 1．2．3、蘩外光谱舅定 分别将单体皂甙R1和Rgl用NaH2P04缓冲溶液溶解成～系列浓度与蛋白质混合，蛋白质浓度不变。 在278．4rim处，测定蛋白质及其与药物混合溶液的紫外吸光度值． 1．2．4、荧光光谱舅定 将三七总皂甙用NaI-12P04缓冲溶液稀释一系列比例与蛋白质混合，蛋白质浓度不变．激发波长为 2、结果与讨论 2,1、荧光猝灭 将两个波长下药物对BSA的荧光猝灭分数列于表I，其中荧光猝灭分数指m．F)-F0。 壅!：至塑整星三主璺垒!堕曼!垒塑鏊娄茎丕坌墼 总皂甙稀释倍数 280nm 295nm 4000 0．7±0．6％0 2667 3．1±1．O％ 1．0±O．6％ 2000 3．3±0．8％ 2．8±O．5％ 1333 5．8±1．1％ 5．1±O．6％ 1000 9．6--．+0．6％ 8．O±1．2％ ．。；…。=五===窖罢k=_：_：：_··——!三尝圭!：!堑 !!：!圭!：!堑 从表1的薮磊耳i西；面丽不磊茇聂苌亍三毛葛亘蒹鬲蚕百磊丽夏亮孬黄蒜，说明蛋白质分 子中酪氨酸和色氨酸的微环境均发生了改变。 执 雕鬻。 默聊 燃机瞰瞄 黼黼 麓黧嗍器洲鬻¨ 肭址郴 篡酗槲彻 焉 2．3、红外差谱 为了能够反映红外谱图中的微小差别，用与三七总皂甙作用前后的蛋白质红外谱图进行差减，差减 看到，当药物浓度增大后．蛋白质的红外差谱中有明显的负峰出现，并且随着药物浓度的增加差减所得 到的负峰强度也明显增加，说明蛋白质结构的改变随药物浓度的增加而增加。 W“●num¨nfcrnlj 图1、不同浓度三七总皂甙与BSA作用前后 图2、不同浓度三七总皂甙对BSA二级结构 红外差谱图 的影响 2．4、红外拟合定量 红外差谱结果显示三七总皂甙引起了蛋白质二级结构的变化，采用红外酰氮I带和酰氨IIl带的拟 合来定量分析蛋白质结构的改变191。分别按照蛋白质酰氨I带与酰