重组人锰超氧化物歧化酶的发酵、分离纯化与其性质研究.pdfVIP

研究论文摘要 全国第七届工业生化学术会议(2002．大连)论文集 株有在氮索极为贫乏的条1，{：F，才能最有效地生物合成不饱和脂肪酸。二级种子中过多的残氮移 入发酵中，对不饱和脂肪酸的生物合成是十分不利的． 在5％、8％、10％、15％、20*,4和25％一--级种子不同移液量试验中，以10％为最佳移液量。 而一级种子的接种量以1．5×10个／mL为宜。 在三级发酵过程中，通过不同移种周期试验，一级和二级种子的移种周期分别为16小时和 18小时为妥。在发酵过程中．温度、通气量和pH的分期控制是十分必要的。该变株分别在60m， 和20m1发酵罐投入生产使用，在发酵工艺优化控制的条件下，表现出其良好产素水平和发酵特 性，工艺控制过程稳定，所有控制参数符合优化工艺过程，罐产量和不饱和脂肪酸含量均达到最 佳值，取得了理想的效果。 重组人锰超氧化物歧化酶的发酵、分离纯化及其性质研究 张艳红 廖晓全 袁勤生 (华东理工大学生物工程学院生物反应器国家重点实验室，上海200237) 人锰超氧化物歧化酶(rMn-SOD)是一种催化超氧阴离子发生歧化反应的抗氧化酶，其基 因定位于人体第6号染色体长臂2区5带(6q25)。Mn．SOD的基因表达量具有伴随细胞癌变的 过程呈正相关下降拘普遍现象。因此有人提出Mn-SOD是潜在的新型肿瘤抑制基因．此外。Mn- SOD能够提高机体对氧应激反应的耐受性。通过清除电离辐射过程中产生的O：+而发挥抗辐射作 用，目前还被应用于治疗缺血再灌注损伤和局部缺血综合症等。但是Mn—SOD在人体内含量极 少．而且分离纯化方法复杂，限制了Mn-SOD的实用性．因此。为了克服Mn-SOD在l临床应用 上的缺陷．本实验利用生物技术制各了重组rMn-SOD，并对其进行发酵．分离纯化及性质研究， 并对其与肿瘤的相关性进行了初步研究。 cDNA，测定了全序列，并在大肠 首先利用分子生物学及基因工程技术。克隆了rMn．SOD 杆菌系统中进行了高效表达．表达量达到50*,4，表达产物具有SOD活性。 用正交实验法和逐步优化法摇瓶培养rhMn-SOD工程菌．得到了较为适宜的培养条件：培 液．比活力为850U／mg．Pr． ihlⅥn．SOD工程菌的发酵液离心得到菌体，经超声破碎、热变性、离子交换层析和Sephadex 术纯化rhMn-SOD，分别用铜螯合和镍螯合自制的琼脂糖层析介质．通知还采用了膜亲和层析技 术都可以达到较为理想的纯化效果，所得的纯化酶经过活性电泳和蛋白电泳验证均达到了电泳 纯． ——122—— 堡塞丝塞塑曼 全旦塑主旦三些兰丝兰垄叁丝!!!!!：盔壅!熊奎整 锰原子的含量为O．88mol／亚基．每个死基含有202个氮基酸残基，N．末端氮基酸为甲硫氮酸 及乙醇一氯仿敏感，但是对过氧化氢、叠氮化钠、7,--胺四乙酸二钠、二甲亚砜等试剂不敏感． 对胃蛋白酶和胰蛋白酶有较强的耐受性。 综上所述，本文通过对薰组人锰超氧化物歧化酶的研究，得到了较适宜的发酵条件和分离 纯化条件并对其相关的理化性质和生化特性进行了研究．从而为重组人锰超氧化物歧化酶的临床 应用提供了一定的理论基础。 一转醛酶与青春期小鼠Leydig细胞生成睾酮的相关性研究 顾冬民 朱慧 刘颖 徐桦 陈丙莺 德伟 (南京医科大学生化与分子生物学系，南京210029) 转醛酶(transaldolase。TAL)是磷酸戊糖途径(pentosephosphatepathway。PPP)非氧化阶 段的关键酶111，其主要作用在于调控磷酸戊塘途径产生5-磷酸核糖和NADPH，前者参与核苷酸 代谢及合成CoA、tAD+等重要分子：后者是生物体内重要的还原当量，不仅维持谷胱甘肽于还 原状态，而且作为供氢体直接参与多种合成代谢反应。因此，转醛酶是细胞基础代谢所必需的， stress)而导致的淋巴细胞凋亡、 而近些年来的研究更表明转醛酶在HIV引起的氧应激(oxidative