从碘化N-正丁基氟哌啶醇对蛋白激酶C的干预探讨其心肌保护作用的分子机制.pdfVIP

损伤作用的一个新型L一型钙拮抗剂。新近研究表明，F。能通过激活新型非钙依赖性PKCe转 位而拮抗心肌细胞H／R损伤，此外，在L一型钙通道缺如的心脏微血管内皮上依然观察到F2 的保护作用，由此，我们推测的F。抗I／R损伤的作用可能还存在非L_型钙通道依赖的机制。 ERR通路是信号从细胞外传递到细胞核的一条汇聚通路。缺血缺氧可以激活ERR，激活的ERK 在心肌I／R损伤过程中发挥了重要作用。本研究将探讨F2对体外培养心肌细胞无外钙条件 下缺氧复氧(H／R)损伤的影响及ERK通路在此过程中的作用。 方法：采用体外心肌细胞H／R损伤模型来模拟体内的心肌I／R损伤。将培养的SD大鼠 其余各组均制作H／R模型，缺氧2h复氧lh，所用缺氧液和复氧液均为不含钙离子且加入了 钙离子螯合剂EGTA的无钙液，F：、PD和U分别加至缺氧液和复氧液中。Westernblot方法 细胞存活率(CCK-8法)、培养液中乳酸脱氢酶(LDH)活性，观察心肌细胞损伤程度。 组ERK表达无明显变化，p-ERK表达下调，细胞存活率增加，LDH活性下降。 结论：F2能通过非L-型钙通道依赖的机制保护H／R导致的心肌细胞损伤，这与其抑制 H／R所致p-ERK表达增高密切相关。 关键词：碘化肛正丁基氟哌啶醇，非L_型钙通道依赖，缺氧复氧，ERK 致谢：NSFC-广东联合基金(U0932005)，高等学校博士学科点专项科研基金 (200805600003)。 通讯作者：石刚刚，Tel：0754E-mail：gg苎bi壁墨主坠：堡鱼坠：塑。 从碘化俨正丁基氟哌啶醇对蛋白激酶C的干预探讨其心肌保护 作用的分子机制 蔡文锋，王锦芝．石刚刚 (汕头大学医学院药理教研室，广东汕头，515041) 目的：通过观察缺氧／复氧(H／R)心肌细胞蛋白激酶C(PKC)及其各亚型活性的变化， 分析其在心肌细胞H／R损伤中所起的作用，并观察碘化胪正丁基氟哌啶醇(F2)的影响，进 一步探讨碘化肛正丁基氟哌啶醇(胪n—butylhaloperidoliodide，FD心肌保护作用的分 子机制。 方法：采用新生SD大鼠原代培养的心肌细胞，缺氧2h复氧30min造成复氧损伤；非放 肌细胞PKCa、BⅡ、8、￡的蛋白表达及其转位的变化；检测H／R心肌细胞早期生长反应 基因-1(earlygrowresponse-I，Egr-I)蛋白表达水平：测定细胞培养上清液中肌酸激酶 (creatinekinase，CK)、肌钙蛋白(cardiactroponinI，cTnI)、肿瘤坏死因子一a(tumor necrosis factor-a，TNF—o)：AnnexinV-FITC／PI双染法检测心肌细胞早期凋亡率。 结果：1、缺氧2h心肌细胞PKC活性达峰值，延长缺氧时间，PKC活性趋于下降；缺氧 2h时进行复氧，PKC活性维持不变，直至复氧120min，PKC活性下降至接近正常水平。缺氧 55 2h复氧30min时，PKC各亚型蛋白表达未发生变化，延长缺氧时间至4h，PKC￡蛋白表达明 显下降，PKCa、B II、6蛋白表达不变。心肌细胞H／R可导致CK、cTnI浓度升高，TNF—a 分泌增多，早期凋亡细胞增加。2、心肌细胞H／R可激活PKCa、B II和￡，分别由可溶性 部分向颗粒性部分转位，PKC a 6由颗粒性部分向可溶性部分转位；F：可以抑制H／R所致PKC 的转位，但激活PKC￡转位，对PKCBII、6转位不影响；同时，F2可以激活正常细胞PKC￡ 发生转位，对正常细胞PKC 蛋白高表达，减少CK、cTnI漏出和TNF—Q的分泌，降低早期凋亡细胞检出率。PKC￡特异 性抑制剂￡VI一2可增加CK、cTnI漏出，加快细胞早期凋亡进程，但对TNF—CI的分泌和Egr—l 蛋白高表达没有影响。4、F。可以明显减少H／R所致心肌细胞的损伤。PKC激动剂 特异性抑制剂￡Vl一2可拮抗F。对H／R损伤的改善作用，但对Egr—l蛋白的高表达没有影响。 结论：l、心肌细胞H／R可引起PKC各