热应激奶牛体外胚胎发育地研究.pdfVIP

——一一．一 堂查笙塞 热应激奶牛体外胚胎发育的研究 丁丽艳1何宝国。 王洪宝1韩永胜t李同豹， 佟桂芝、 61 6104 (1黑龙江省畜牧研究所，l005；2齐齐哈尔医学院，12) 摘要：本论文主要研究目的是处于热应澈生理状态下的奶牛，其卵母细胞体外成熟． 受精及发育有何影响。试验选择12头干奶期或接近干奶期荷斯坦奶牛，处于夏季热应激 状态下，没有任何降温设施，自由饮水。经FSH超排后，利用活体采卵技术，采集卵 母知胞。其中2头超排无反应，10头奶牛共采集卵母细胞1169枚，可用623枚，可用 为5％，饱和湿度；试验I妞卵母细胞成熟和受精过程予以试验条件(培养温度模拟热应 激奶牛直肠24h波动温度，同时C02％也随之调整，以保持溶液PH值在7．4左右，调 整过程中02％不变，通过调整N2％采达到气体平衡，饱和湿度。)，以后则改为正常 培养条件r温度为38．5℃，C02％为5％，饱和湿度J；试验Ⅱ扭则整个试验过程都 68．10％r149／210J，受精丰为40．56％(58／143J，囊胚发育丰为22．41％f13／58j (pO．05)。 关键词：热应敝奶牛体外受精囊胚丰 1试验材料与方法 1．1 试验奶牛 黑龙江省畜牧研究所试验牧场引进的加拿大荷斯坦奶牛。 1．2 试验药品 99液、HePes—TALP液，IVF—TALP液、 FsH(加拿大生产)；其它试剂(TCM一1 CRlaa液等)为5IGMA公司生产；FCS为生物制药厂生产。 1．3试验方法 1．3．1测试热应激奶牛直肠温度夏季高温天气情况下，奶牛放在露天运动场，自由采 食、自由饮水，无任何降温设施。使用水银温度计来测量奶牛直肠温度。在1d时间内(从头一 天早晨7：00至第二天早晨6：00)，每隔lh测一次直肠温度、空气温度和地面温度(每一点的 数值是连续测量一周的平均值)。 1．3．2体外胚胎生产将试验奶牛用FSH进行超排后，利用活体采卵技术[61，采集卵母 细胞(采集情况见表1)。经过实验室处理后‘“，将卵母细胞复合体培养在覆盖有矿物油的、 u1／微滴，20—25 预先放入C02培养箱中平衡2小时的卵母细胞培养液(TCM一199)中(50 个／微滴)。每组(对照组、试验I组、试验I【组)培养i0滴，培养24h。将成熟的卵丘细胞 复合体用Hepes～TALP液清洗，然后放进预先制备好(覆盖矿物油后放入C02培养箱中平衡2 uI／滴)中。 小时)的IVF—TALl液滴(600 53 中国畜牧兽医学会信息技术分会成立大会暨首届学术研讨会 一————————————————————————————_——————————●——’——————_—————————————————_——————————●—————_————————_————————一 0 用梯度离心法洗净的精子放迸成熟卵母细胞中(密度为1×1 6个精子／滴)，培养 24h，然后将合子培养在cRl ul aa液中。受精后第5d在培养滴中加入5 FCS，培养第8天 测定发育囊胚数。 1．3．3 培养温度与CO。％确定 胚胎培养温度与热应激奶牛直肠温度相似，C0。％随着培养温度变化而变化。正常培养条 件时， 38．5℃下c0，为5％。当在高温下培养时，c0，％调整为：39．5℃下5，5％、40．5℃下