饲用纤维素酶热稳定性地研究.pdfVIP

饲用纤维素酶热稳定性的研究 冯毛王卫国 于海洋 (河南工业大学生物工程学院，河南郑州450052) 摘 要对不同热处理参数一温度70～lOOT：，时间30～150s条件下纤维素酶的活性进行了 测定。结果表明：纤维素酶的活性损失率随处理温度的升高和时问的延长而增大。不同处理温度间， 酶活性损失率差异极显著(P0．01)，不同处理时间，酶活性损失率差异显著(P0．05)。 关键词纤维素酶热处理热稳定性酶活性 纤维素酶是能够水解B—l，4葡萄糖苷键，使纤维素变成纤维二糖和葡萄糖的酶。它是一个复 合酶系，至少包括三类不同性质的酶：Ct酶、cx酶和B一葡萄糖苷酶。c，酶能将天然纤维素水解成无 定形纤维素，Cx酶的作用是将无定形纤维素继续水解成纤维寡糖，B一葡萄糖苷酶的作用是将纤维 寡糖水解成葡萄糖。可见，c，酶和cx酶对纤维素酶系的质量起决定性作用。由于纤维素酶水解纤维 素产生的纤维二糖、葡萄糖等还原糖能将碱性条件下的3，5一二硝基水杨酸(DNS)还原，生成棕红 色的氨基化合物，在540nm波长处有最大光吸收，在一定范围内还原糖的量与反应液的颜色强度呈 比例关系，因此利用比色法测定其还原糖生成的量就可测定纤维素酶的活力。 用于工业化生产纤维素酶的微生物有木霉、黑曲霉、镰刀霉、根霉、青霉、真菌以及反刍动物 瘤胃菌丛培养物。 纤维素酶的热稳定性因酶的菌种来源不同而差异明显‘11，各种常用纤维素酶的 性质如下‘柏： 表1 各种纤维素酶的性质 研究发现，纤维素酶能补充动物内源酶的不足，激活内源酶的分泌，促进养分的消化吸收，减 轻或消除饲料抗营养因子的影响，改善动物健康和肠道形态结构等功效，近年来，纤维素酶在饲料 工业上的应用己受到饲料界和生物工程人士的高度重视。由于纤维素酶的最适温度较低，热稳定性 较差，在调质、制粒和挤压膨化过程中， 温度可达到60℃～130℃，而温度的升高将导致酶的活力 的损失甚至完全失活。本试验的目的是就不同温度和不同处理时间对纤维素酶活力的影响进行研 究，了解其活性变化规律，为酶制剂的后喷涂提供理论依据。 1材料与方法 1．1主要试验材料仪器 1．1．1纤维素酶制剂 购自无锡酶制剂厂，最适温度范围50℃～60℃，最适pH植范围4．5～5．5。 1．1．2主要仪器 VIS一732G分光光度计恒温水浴锅 万分之一分析天平 1．1．3实验试剂 104 3，5硝基水杨酸(DNS)、氢氧化钠、酒石酸钾钠、苯酚、无水亚硫酸钠、柠檬酸、柠檬酸 钠、羧甲基纤维素钠、无水葡萄糖 1．2实验方法 (1)C。酶活力的测定一DNS法D1 (2)纤维素酶的热处理(湿法) 120，150s，然后迅速冷却，测定此时Cx酶的活力，计算与常温下的相对活力。 2实验结果与分析 2．1DNS法测定常温下酶活力及热处理后酶液相对活力 u 酶活力单位(u／g)定义：在pH值5．0、50C的条件下，每小时由底物生成1mol葡萄糖所需 x 的酶量。常温下纤维素酶的Cx酶活力：1．44104U／g 2．2热处理后酶液的相对活力(见表2)： 表2不同热处理条件下纤维素酶cx酶相对活力列表 处理时间＼ 70℃ 80℃ 90℃ 100℃ 淤芝 30S 72．1 65．0 51．5 24．3 60S 68．9 50．2 39．7 12．3 90S 65．0 48．2 33．0 5．3 120S 59．2 44．5 27．5 2．94 150S 54．2 41．0 12．3 O．7