农杆菌介导法将LFY基因导入嘎拉地研究.pdfVIP

210园艺学进展(第七辑 农杆菌介导法将LFY基因导入嘎拉的研究 刘．静1李湘利1徐继忠2 (1济宁师范专科学校生物系，山东 摘要：以嘎拉苹果叶片为外植体，利用GUS瞬时表达率，对农杆菌介导法转化苹果 的因素进行优化，通过将含拟南芥中克隆的LFY基因的根癌农杆菌EHAl05转化苹果叶 片，获得了提早开花的转基因植株。PCR检测初步证明LFy基因已整合到苹果再生植 株中。 关键词：苹果；农杆菌；遗传转化；LFY；GUS transformation Abstract：Thefactors mediated affectingapple byAgrobacteriumtumefa- cienshadbeenstudied GUStransient asdifferentco-cultivationtime． through expression．Such et ofGalawastransformed differentbacteriumdensitya1．Apple by Agrobacteriumtumefaciens EHAl05LFYfrom was PCR thatthe cartinggene Arabidopsis．Itprovedby analysis target intothe of LFyhadbeenintegratedgenomeregeneratedplants． gene GUS Keysword：Apple；Agrobacteriumtumefaciens；genetictransformation；LFl0 苹果是我国主要的果树树种，但其进入结果期较晚，影响了早期经济效益的获得。目前生产上促进 苹果提早开花的技术很多，主要为采取环剥、喷施多效唑等控制树体生长，促进花芽分化，这些方法受 多种因素影响，有时效果不十分理想。通过生物技术将促进开花的基因转入苹果基因组内从而促进其提 早开花结果是一条十分重要的途径，将获得‘一劳永逸’的效果。自从拟南芥中分离克隆了植物花同源 异型基因之后，相继在苹果、柑橘等果树中克隆到相关基因，并通过转基因技术将这些基因导人了杨 树、猕猴桃获得了相应的转基因植株。目前国内已有克隆苹果LFy基因eDNA的报道，但尚未有转化 苹果的相关研究报道【“。 本研究以嘎拉苹果叶片为外植体，研究农杆菌侵染浓度及共培养时间等因素对苹果遗传转化的影 响，通过研究GUS瞬时表达率，并对侵染后的抗性芽进行继代筛选，以获得提前开花的嘎拉苹果。 1材料与方法 1．1材料 1．1．1植物材料供试材料为嘎拉，由河北农业大学园艺学院生物技术中心提供。 1．1．2 学提供。 1．1．3培养基叶片培养基：MS+BA 收稿日期：2005—12一i1I修回Et剪I：2006。05—15。 基金项目：河北省科技厅资助项目)。 com)。 果树211 ‘ (pH5．8)。 Cef)300mg／L(pH5．8)。 1．2方法 1．2．1农杆菌介导叶盘转化法技术路线 平板活化(2d)一液体培养(24h)—，悬浮培养至O