急性出血坏死性胰腺炎小鼠Th1%2fTh2变化规律与中药干预作用研究.pdfVIP

急性出血坏死性胰腺炎小鼠Thl／Th2变化规律 及中药干预作用研究 傅强 崔乃强 邵伟 曾宪民崔乃杰 天津南开医院外科 天津市第一中心医院 【摘要】目的：探讨急性出血坏死性胰腺炎小鼠早期出现T淋巴细胞亚群Thl／Th2变 化规律，观察参麦及黄芪注射液的干预作用。方法：65只昆明小鼠随机分为假手术组 5只，胰腺炎组、参麦治疗组、黄芪治疗组各20只，采用腹腔连续注射雨蛙素加末次 注射内毒素的方法造成小鼠急性出血坏死性胰腺炎模型，治疗组分别在造模后腹腔注 射参麦注射液及黄芪注射液，于末次注射完毕后2h、6h、12h、24h分别测定各组动物 脾细胞的Thl／Th2比值及血浆淀粉酶，观察胰腺及小肠病理变化。结果：胰腺炎组造 模后6小时胰腺病理及血浆淀粉酶提示出现急性出血坏死性胰腺炎，同时出现脾细胞 1)。 疗组此种变化较轻，在造模后24小时参麦注射液较黄芪注射液疗效更显著(pO．O 结论：小鼠急性出血坏死性胰腺炎早期出现免疫失衡，参麦及黄芪注射液对此有调节 作用。 【关键词】急性出血坏死性胰腺炎；小鼠；T辅助淋巴细胞亚群；中药 急性出血坏死性胰腺炎导致组织损伤可刺激炎症细胞释放多种炎症介质，并促发炎 症介质瀑布样释放，导致全身炎症反应综合征(SIRS)。与此同时，机体通过内源性抗炎 症机制，即代偿性抗炎症反应综合征(CARS)，对炎症介质有拮抗作用，同时导致细胞免 疫功能的抑制。SIRS和CARS之间的平衡决定了机体内环境的稳定性，决定了急性出血 坏死性胰腺炎的后果…。研究显示，T辅助淋巴细胞(TH)，特别是Thl和Th2细胞功能 衡心’。本文对急性出血坏死性胰腺炎小鼠早期出现T淋巴细胞亚群Thl／Th2变化规律及 中药干预作用进行观察，报道如下。 108 材料和方法 I附 IL-4 EL404美国RD公司)购 测定试剂盒(ELISpot，MouseEL485，Mouse 自晶美生物工程有限公司，参麦注射液(四川升和制药公司，20ml／支)黄芪注射液(成 国)，Leica显微镜自动分析系统(德国)。 1．2实验动物及分组健康雌性昆明小鼠65只(购自天津市药物研究所，许可证号： 型组)20只，参麦治疗组20只，黄芪治疗组20只。 1．3动物造模m。所有受试动物于实验前禁食18小时，自由饮水，除假手术组动物， 其它组小鼠经腹腔注射雨蛙素50g／kg，每次间隔1小时，连续6次，在末次雨蛙素注 射后，即向腹腔内注射脂多糖lOmg／kg。假手术组小鼠腹腔内注射等体积生理盐水。参 麦治疗组于末次注射完毕后经尾静脉注射参麦注射液0．5ml／只，黄芪治疗组于末次注射 完毕后经尾静脉注射黄芪注射液0．5ml／只。 1．4观察指标胰腺炎组、参麦治疗组和黄芪治疗组于末次注射完毕后2h、6h、12h、 24h分别取5只动物加之假手术组5只动物用眼球取血法收集血液，测定血淀粉酶、 病理观察(光镜)。 1．5血淀粉酶检测方法：参照说明书由生化实验室人员操作完成。 取动物脾脏，蒸馏水洗净，剪碎研磨，过筛，光镜下计数，并将细胞数调为l×106／ml。 用50ng／ml佛波醇12一myristate一13-醋酸盐和0．5 g／ml钙依诺酶素刺激在加湿的37℃ 二氧化碳孵箱中孵育细胞过夜。②用2001消毒培养基注入一个孔在室温至少孵育20 分钟。吸除培养基，立即在每个孔中加入1001淋巴细胞悬液或对照液。③吸除并清洗 每个孔，重复3次以达到总数4次冲洗。冲洗时将冲洗缓冲液250-300l加满每一个孔。 在最后一次清洗后吸除或倾倒所有残留冲洗缓冲液。翻转并将板子放在干净的纸巾上。 ④分别加100 100l稀释链亲和素碱磷酶在每个孔中并于室温孵育2小时。加1001BCIP肿T色原体 在每个孔中并于室温孵育l小时．避光。⑥从微量反应