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血清谷丙转氨酶活性的测定 实验目的 掌握谷丙转氨酶活性测定的 原理和方法 血清谷丙转氨酶作用于由丙氨酸及a一酮戊二酸组成的基质。产生丙酮酸及谷氨酸 血清加基液保温后产生丙酮酸的多少，即反应出谷丙转氨酶活性的大小。 丙酮酸与2，4-二硝基苯肼作用生成丙酮酸二硝基苯腙，在酸性溶液中显黄色，在碱性溶液中成醌型显棕红色。 本实验是在碱性条件下，生成醌类化合物的量反应丙酮酸的量，即反应了谷丙转氨酶的活性。 本法以lml血清与基质液在37℃，保温30分钟生成2.5μg丙酮酸为谷丙转氨酶活性1单位 求酶活性单位的方法： 1、标准品对照法：检品与标准丙酮酸液同样处理呈色，进行比色，计算出酶活性单位。 2、标准曲线法：取含待测物的一系列标准溶液，作标准曲线，由标准曲线查得活性单位。 一、标准品对照法 取试管4支，标号，按下表加试剂： 计 算 注意事项 操作中加 0.4N NaOH液时，需以较慢速度加入，并且边加边摇匀加快时则a一戊酮二酸引起的发色增强。 本实验中各试剂加量都需要准确，并且要注意控制条件，保温时间要严格 本法测定SGTP正常值为40单位以下。 分析实验误差产生的原因 血清GPT活性测定的意义 * * * * * 实验题目 实验原理 基 质 液 呈 色 试 剂 4个管同时放入37℃水浴中。 准确保温30分钟， 水 丙 酮 酸 血清 基质液 0.5 0.5 0.1 — — — S’（标对照） — 0.5 — 0.1 — 0.5 S（标准） 0.5 0.5 — — 0.1 — B（检对照） — 0.5 — — 0.1 0.5 A（检品） 实验操作 56℃放置5分钟。 加0.4N NaOH液5.0ml 慢慢加入（约1分钟），边加边混匀。 室温放置 30分钟， 测OD值，波长 520nm，用蒸馏水调零点。 （ODA-ODB） （ODs-ODs＇） = X （待测样品丙酮酸含量） 50ug/ml × 0.1 ml X = （ODA-ODB） （ODs-ODs＇） × 5 SGPT单位= （ODA-ODB） （ODs-ODs＇） × 5 0.1 2.5 × = （ODA-ODB） （ODs-ODs＇） × 20 二、标准曲线法 配制一系列不同浓度的标准丙酮酸液，并且各加以适量的基质液， 作成标准曲线。具体做法如下表。 - 0.5 0.5 - 0 0.4 0.5 0.1 20 80 0.3 0.5 0.2 15 60 0.2 0.5 0.3 10 40 0.1 0.5 0.4 5.0 20 0.05 0.5 0.45 2.5 10 标准丙酮酸（50μg/ml） 基质液ml 蒸馏水ml 丙酮酸含量μg 相当GPT单位 空白 5 4 3 2 1 管号 。 各管混匀，放37℃水浴5分钟 加0.4N NaOH液5.0ml 慢慢加入（约1分钟），边加边混匀 然后各加呈色试剂0.5ml，混匀 56℃放置5分钟。 室温放置 30分钟 测定OD值, 波长 520nm，用蒸馏水调零点。 OD值 S’ S B A 一标准对照法 １.原始数据记录 2、公式计算酶活性单位（要求带入数据，写出结果） 二、标准曲线法 １.原始数据记录 -------- OD标准 – OD空白(纵坐标) OD标准 --------- 80 60 40 20 10 标准GPT单位(横坐标) 2 1 空白 5 4 3 2、绘制标准曲线，（要求规范作图） 3、通过方法一的ODA-ODB，在标准曲线中，查得酶活性单位 实验结果 实验讨论