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实验研究 兔葡萄球菌的分离与鉴定 王孝友-，王永康2，杨睿1，付利芝1，沈克飞-，李成洪1，杨松全1，黄伟， (1．重庆市ii4t科学院，荣昌402460；2．重庆市畜牧技术推广总站，重庆401121； 3．西南大学荣昌校区，荣昌402460) 摘要：对重庆市某兔场洪灾后发生化脓性疾病的母兔进行了病原诊断，通过细茵分离培养、染色镜检、 生化试验、血浆凝固酶试验、动物接种试验、16SrRNA基因扩增及测序，证明本茵是金黄色葡萄球菌，其 基因序列同源性与金黄色葡萄球茵高达99％。药敏试验结果表明，本茵对氨苄青霉素、先锋V、茵必治、 氨苄青霉素衔巴坦高度敏感。兔场立即选用敏感的药物，并结合综合防治措施，使疫情得到有效控制。 关键词：兔；葡萄球茵；分离；鉴定 中图分类号：S829．1 文献标识码：A 文章编号：1005—6327(2011)04-0012—03 重庆市某兔场水灾后陆续发病．约15％的种兔和 果。 30％的幼兔发病，发病兔死亡率达90％以上，临床表现1．5血浆凝固酶试验 为胀气、腹泻以及严重的呼吸道症状。其中有一部分母 取3支灭菌的小试管，编号1、2、3(1号为试验管， 兔还表现为皮下脓肿、乳房炎。病理变化主要是气管出 2号、3号为对照管)，分别加入l：4新鲜兔血浆lmL， 血，肺出血。有大小不一的脓包。笔者对这部分患有化 在l号试管中加入已培养24h的分离菌肉汤纯培养物 脓性疾病的母兔进行了细菌分离鉴定．通过药敏试验 lmL．2号试管中加入已培养24h的大肠杆菌肉汤纯培 筛选了敏感的药物。为临床防治提供依据。 养物lmL，3号试管中加人普通肉汤lmL，混匀，置 1材料与方法 36。C恒温箱培养5h，每小时观察1次，记录结果。 1．1主要试剂 1．6动物试验 普通琼脂平板、鲜血琼脂平板、普通肉汤，3．8％柠 1．6．1小白鼠接种将分离菌接种普通肉汤。置37℃ 檬酸钠，l：4新鲜兔血浆由本实验室制备。药敏纸片购 恒温箱培养24h。试验小白鼠4只，试验组、对照组各2 于杭州微生物试剂有限公司；PCRMaster购自Invitro— 只。试验组小白鼠腹腔注射普通肉汤培养菌液，每只 Extraction 0．2mL，对照组小白鼠腹腔注射普通肉汤，每只0．2mL。 gen公司：2000Marker购自Takara公司；Gel Kit购自OMEGA公司。 观察发病及死亡情况．对死亡小白鼠解剖、细菌分离培 1．2细茵分离培养 养、染色镜检。 解剖病死兔，切开脓包，挤出浓汁，将肝脏、肺脏、 1．6．2家兔皮下接种健康家兔4只。试验组、对照组 化脓灶均接种于普通琼脂平板、鲜血琼脂平板、普通肉 各2只。试验组每只皮下注射lmL分离菌24h肉汤培 汤，置370C恒温箱培养24h，观察结果。 养物。对照组每只皮下注射lmL普通肉汤。每天观察 1．3染色镜检 发病情况。对发病或死亡兔进行解剖、细菌分离培养、 将分离培养的细菌进行革兰氏染色、镜检。 染色镜检。 1．4生化试验 1．6．3家兔静脉注射健康家兔4只．试验组、对照组 将普通肉汤纯培养菌液分别接种葡萄糖、乳糖、麦 各2只．试验组每只静脉注射0．5mL分离菌24h肉汤 芽糖、甘露醇、蔗糖、硝酸盐还原、明胶液化生化试验 培养物，对照组每只静脉注