临床分离结核分枝杆菌与耐药性分析.pdfVIP

临床分离结核分枝杆菌的耐药性分析 周 庆 方中飞 沈小英 宋 冰 方孝美 海盐县人民医院检验科 结核病是目前严重威胁人类健康的重大传染性疾病之一，但只要早期诊断和合理用药，绝大多 数的结核病人可以治愈。多年来，化学疗法在控制结核病的流行上发挥着巨大的作用，使约 90%以 上的初治肺结核病人获得治愈。但是由于抗结核化学药物的广泛应用，特别是在治疗过程中不规范 用药，导致出现耐药结核分枝杆菌，尤其是多重耐药结核分枝杆菌，造成目前结核病疫情有所回升， 成为结核病较难控制的一个重要原因。为了了解海盐县结核分枝杆菌的耐药状况，我室于2004 年9 月 1日起至2005 年9 月31 日止对来我院进行治疗的痰涂片阳性肺结核病人中分离的结核分枝杆菌 进行耐药性监测，现将结果报告如下。 1. 材料与方法 1.1 实验菌株的选择 初治组分离自初治肺结核病人的结核分枝杆菌 102株（初治病人指在监测期内 就诊的全部新发涂阳肺结核病人，在痰涂片阳性的基础上作痰结核分枝杆菌培养。培养阳性又未曾 接受过抗结核药物治疗，或用药时间小于 1个月的肺结核病人）；复治组分离复治病人的结核分枝杆 菌29 株（复治病人指在监测期内就诊的复发、治疗失败、接受过一个月以上抗结核药物治疗的肺结 核病人）。 1.2 实验室检查方法 1.2.1 痰涂片 用萋-纳氏抗酸染色法镜检，染色液由浙江省疾病预防控制中心提供。每个病例查痰 三次：即咳痰、过夜痰、晨咳痰。 1.2.2 痰培养 用酸性罗氏培养基，培养基由上海肺科医院提供，批号20041115、 20050630。严格按照中国防痨协会基础专业委员会编写的《结核病诊断实验室检验规程》 进行操作。 1.2.3 药敏试验 采用绝对浓度法进行检测，凡培养阳性菌株进行四种抗结核药：异烟肼（H）、利 福平（R）、链霉素（S）、乙胺丁醇（E）耐药性测试。培养基的药物浓度分别为异烟肼高浓度 10µg/ml， 低浓度 1µg/ml；利福平高浓度250µg/ml，低浓度50µg/ml；链霉素高浓度 100µg/ml，低浓度 10µg/m； 乙胺丁醇高浓度50µg/ml，低浓度5µg/ml。 1.2.4 耐药判定标准 含高、低浓度药物培养基均不生长，对照管生长10 个菌落为敏感（S），含 高浓度药物培养基不长（菌落数为零）、低浓度培养基生长（菌落数≥1）为中介（I），含高、低浓 度药物培养基均生长为耐药（R）。H、R、S、E 用同一标准。 2 1.2.5 统计方法 对每一入选病例的药物敏感性进行资料分析，率显著性检验用X 检验，取95%可信 限。所有数据保留一位小数。 1.2.6 耐药基因实时PCR 检测试剂购自无锡市克隆遗传技术研究所，参考文献Hillemann D 等报道 的方法合成rpoB 和 katG 基因的引物及PCR 检测探针，并参考其方法进行实时扩增检测。 2 ．结果 2.1 耐药性测定结果 临床分离的 131 株结核分枝杆菌中，耐药 19 株，总耐药率 14.5%；分离自初 ～799～ 治病人的 102株菌中，耐药8 株，初治耐药率为7.9%；分离自复治病人的29 株菌中，耐药 11株， 2 耐药率为 38.2%，初治和复治患者的耐药率差异有显著性，X =16.5，P0.001，其具体的耐药情况 见表 1。 2.2 耐多药率 19 株耐药菌中，耐多药 6 株，耐多药率 4.6%，（6/131），其中初始耐多药率 1.0% 2 （1/102），复治组耐多药率 17.2%（5/29），统计学处理差异有显著性（X =18.9，P0.001）。 2.3 耐药基因检测结果 在初始组中rpoB 和 katG 的突变率为 12.7%（13/102）和 10.8%（11/102）。 复治组中 rpoB 和 katG 的突变率为 31.0%（9/29）和 20.7%（6/29），19 株耐药菌株中，均检测到