苏木素伊红（HE）染色试剂盒.docVIP

苏木素伊红(HE)染色试剂盒 一、产品简介： 苏木素(Hematoxylin)和伊红(Eosin)染色，简称HE染色，是病理学常规制片中最基本的染色方法，应用机器广泛。苏木精是从原产中南美的洋苏木中提取出来的浅黄褐色的结晶，是一种碱性染色剂，它在被氧化后生成苏木素，同媒染剂(常用的是三价的铝或盐铁)一起使用，能够使细胞核染色。在病理诊断、教学和科研工作中，常用HE染色对正常组织和病变组织进行形态结构观察。对于确定或鉴别病变组织、细胞中出现的某些异常物质与特殊成分，而需要采用的特殊染色方法、酶组织化学方法、免疫组织化学方法等也均是在观察HE染色组织切片的基础上进行的。在HE染色的组织切片中，细胞核呈蓝色，细胞浆呈红色，二者形成鲜明的对比，易于观察分析。 森贝伽生物苏木素伊红染色试剂盒中，苏木素染色液采用进口的高纯度苏木精、硫酸铝钾、甘油等组成，不含氧化汞、甲醇等有害物质，对细胞核染色效果好。其特点：长期保存，不易产生沉淀和金属;应用范围广，可以用于人、动物、畜牧、水产等领域，可以用于组织石蜡切片、冰冻切片和组织细胞的染色等；苏木素染色液可以重复使用。 二、染色原理： 1、细胞核染色的原理： 苏木素为碱性天然染料，可使细胞核着色。细胞核内染色质的成分主要是DNA，在DNA双螺旋结构中，两条核苷酸链上的磷酸基向外，使DNA双螺旋的外侧带负电荷，呈酸性，很容易与带正电荷的苏木素碱性染料以离子键或氢键结合而被染色。苏木素在碱性溶液中呈蓝色，所以细胞核被染成蓝色。2、细胞浆染色的原理： 伊红是一种化学合成的酸性染料，在一定条件下可使细胞浆着色。细胞浆的主要成分是蛋白质，为两性化合物，细胞浆的染色与染液的pH值密切相关。当染液的pH值在胞浆蛋白质等电点(4.7～5.0)以下时，胞浆蛋白质以碱式电离，则细胞浆带正电荷，就可被带负电荷的酸性染料染色。伊红在水中离解成带负电荷的阴离子，与胞浆蛋白质带正电荷的阳离子结合，使细胞浆着色，呈现红色。3、分化作用： 染色后，用某些特定的溶液将组织过多结合的染色剂脱去，这个过程称为分化作用，所用的溶液称为分化液。在HE染色中常用1%盐酸乙醇作为分化液，因酸能破坏苏木素的醌型结构，使组织与色素分离而退色。经苏木素染色后，必须用1%盐酸乙醇分化，使细胞核过多结合的苏木素染料和细胞浆吸附的苏木素染料脱去，再进行伊红染色，才能保证细胞核与细胞浆染色的分明。4、返蓝作用：分化之后，苏木素在酸性条件下处于红色离子状态，呈红色；在碱性条件下处于蓝色离子状态，呈蓝色。组织切片经酸性乙醇分化后呈红色或粉红色，故分化之后，立即用水除去组织切片上的酸而中止分化，再用弱碱性水使苏木素染上的细胞核呈现蓝色，这个过程称为返蓝作用或蓝化作用。另外用自来水浸洗也可使细胞核返蓝，但所需时间较长。 三、产品组成： 试剂(A):改良Lillie-Mayer苏木素染色液100ml500mlRT避光 试剂(B):伊红染色液100ml500mlRT避光 四、主要成分： 试剂(A):主要由苏木素、甘油等组成。试剂(B):主要由伊红、防腐剂、氧化剂等组成。 自备材料： 1、1%酸性乙醇分化液,亦可采购酸性乙醇分化液 2、弱碱性水，亦可采购氨水溶液(0.1%) 3、碳酸锂水溶液,亦可采购碳酸锂水溶液(1%) 4、无水乙醇、95%乙醇、90%乙醇、80%乙醇等系列乙醇 5、4%的多聚甲醛，亦可采购多聚甲醛溶液(4%PFA) 五、操作步骤（仅供参考）： 石蜡切片染色 1、切片脱蜡至水 ①二甲苯作用2次，每次5～10min。 ②（可选）无水乙醇作用2次，每次3～5min。 ③95%的乙醇3～5min ④90%的乙醇3～5min ⑤80%的乙醇3～5min ⑥自来水或蒸馏水冲洗1～3min 2、染色 ①改良Lillie-Mayer苏木素染色液染色5～8min ②自来水或蒸馏水冲洗5～10s ③1%酸性乙醇分化（可以省略）2～5s ④自来水冲洗20～30s ⑤弱碱性水(如0.2%氨水或1%碳酸锂)返蓝20～40s ⑥自来水冲洗30～60s ⑦伊红染色液染色3～5min ⑧自来水冲洗1～5s2、脱水、透明、封固 80%乙醇10～20s ②90%乙醇10～20s ③95%乙醇作用2次，每次1～2min。 ④无水乙醇作用2次，每次2～3min。 ⑤二甲苯透明3次，每次2～3min。 ⑥中性树脂封片。 染色结果：细胞核呈蓝色；细胞质、肌纤维、胶原纤维、甲状腺胶质等呈深浅不一的红色；角蛋白、红细胞等呈明亮的橙红色。 （二）冰冻切片染色 1、乙醚-乙醇混合固定液5～10s 2、自来水冲洗2～5s 3、改良Lillie-Mayer苏木素染色液滴染1～2min(可加热至50℃)。 4、自来水冲洗2～5s 5、1%的酸性乙醇分化液（可选）2～5s 6、自来水冲洗2～5s 7、弱碱性水