O型口蹄疫病毒猪源分离株VP1基因特征分析.pdfVIP

四川省畜牧兽医学会2010年学术年会 O型口蹄疫病毒猪源分离株VP1基因特征分析冰 杨 鑫王红宁 周英顺 高 荣 曾 博 徐昌文 丁梦蝶 (四川大学生命科学学院，动物疫病防控与食品安全四川省重点实验室，生物资源与生态环境教育部重点实验室， “985 7程”西南资源环境与灾害防治科技创新平台四川，成都6]0064) 摘 群抗原指数与东南亚亚型缅甸98谱系相似，而与古典中国、泛亚两种亚型的差别较大。为口蹄疫疫苗毒 株的选择提供参考。 关键词 口蹄疫病毒0型；东南亚亚型缅甸98谱系；VPl 口蹄疫(Foot—and—MouthDisease，FMD)是由口蹄疫病毒引起的感染牛、羊、猪等偶蹄动物的一种急 性、热性、高度接触性传染病，被世界卫生组织(OIE)列为动物A类传染病之首。口蹄疫病毒 Disease l型、SAT2型、SAT (Foot—and—Mouthvirus，FMDV)属于小RNA病毒科，分为O型、A型、C型、SAT 3型以及Asial型等7种血清型，每个血清型又分为多个亚型。 在口蹄疫病毒结构基因中，VPl基因不仅常作为划分同一血清型FMDV中不同基因型的依据，而且可 利用VPl基因核苷酸序列分析，比较毒株间的核苷酸同源性，为FMD流行的特征分析提供理论依据。另 外，VPl基因编码的VPl蛋白是决定病毒抗原性的主要成分，能诱导动物产生中和抗体，但VPI的变异则 可能引起疫苗对口蹄疫病毒的免疫失效。 O型口蹄疫病毒在全世界广泛流行，可分为lo个亚型，在我国主要流行古典中国株(Cathay)、泛亚 (Pan Asia)以及东南亚(SEA)三种亚型毒株。其中，口蹄疫东南亚亚型毒株主要在缅甸、老挝、越南等东南 亚国家流行。2009～2010年，我国部分地区出现口蹄疫疫情，经国家13蹄疫参考实验室诊断，流行毒株为 口蹄疫东南亚亚型缅甸98谱系。本研究通过对分离鉴定的4株O型口蹄疫病毒VPl基因测序，并与 Genbank中已报道的O型口蹄疫毒株VPl基因进行序列比对以及抗原性、进化树等比较分析，以掌握目前 该亚型0型口蹄疫的分子流行特征，为13蹄疫疫苗毒株的调整提供科学依据。’ ·基金项目：国家科技支撑计划“荣昌猪健康养殖生物安全控制技术研究与示范”(课题编号2007BAD51805)，四川省“生猪 现代产业链关键技术研究与集成示范”项目 218 第三篇疾病防治 1材料和方法 1．1 毒株 与食品安全四川省重点实验室提供，经国家参考实验室鉴定。34株口蹄疫参考毒株VPl基因序列资料均 引自GenBank。 1．2菌种与试剂 感受态DH5ctl{l动物疫病防控与食品安全四川省重点实验室提供。RNA提取试剂TRIzol Reagent、反 转录酶SuperScriptTM购自Invitrogen公司。LATaq 收纯化试剂盒购自美国OMEGA公司。 1．3 引物设计与合成 · 根据参考毒株基因组序列，使用Primer5．0软件设计了包括了扩增O型口蹄疫VPl基因全序列的l对 3’。由上海生工生物工程技术服务有限公司合成。 1．4病毒RNA的提取 参照TRIzol Reagent试剂说明书提取病毒总RNA。 1．5 VPl基因扩增 使用Random oc退火lmin、72 PCR反应条件为：9412预变性5min；94℃变性50S、53oC延伸lmin，共30个循环；最后 72℃延伸10min。PCR产物经0．8％琼脂糖凝胶电泳观察。 1．6 目的片段的克隆、鉴定与VPl基因序列的测定 目的基因引物对单个菌落进行PCR鉴定。阳性重组子的测序由上海生工生物工程技术服务有限公司完成。 1．7序列分析 用MAGE4．0以VPl基因序列为基础做系统进化树分析。 2结果 2．1 VPl基因的扩增 使用设计的引物，通过RT—PCR方法扩增出4株病毒的目的基