莱茵衣藻硫胁迫相关microRNA检测及其靶基因分析.pdfVIP

第28卷第3期 深圳大学学报理工版 VoL28No．3 OFSHENZHENUNIVERSITYSCIENCEANDENGINEERING Mav201l 2011年5月 JOURNAL 文章编号：1000-2618(2011)03-0237·06 【生物工程】 胡章立，舒龙飞，苟德明 深圳市海洋生物资源与，圭态环境重点实验室，深圳大学生命科学学院，深圳518060 nucleolar 子RNA(smallRNA，snoRNA)作为内参，用SYBR@greenRT—PCR对3种与莱茵衣藻缺硫胁迫反 MicroRNAs 应相关的miRNA进行检测，利用在线平台软件Web 测．结果表明，在缺硫胁迫下，3种miRNA(miRNAll45．2、miRNAl 戊糖途径调控． 关键词：生物工程；分子生物学；莱茵衣藻；缺硫胁迫；小分子核糖核酸；实时定量反转录聚合酶链式反应 中图分类号：Q74 文献标识码：A 通常只有几个碱基的差别，且在细胞中表达水平普 microRNA(miRNA)是一类存在于真核生物 遍偏低，这些特性给miRNA定量检测方法的建立 中，长度约为21nt的非编码单链小分子RNA．它 由一段具有发卡结构的单链RNA前体经剪切加工 带来诸多困难．目前主要的定量检测方法包括 Northern 后生成，能与靶基因mRNA进行不完全配对，引起 blot法¨J、微列阵法¨1和Taqman探针法一。 靶基因降解或抑制其翻译¨J．1993年，在研究线虫等．No．hemblot法只能半定量表示，且花费时间 发育调控时miRNA被发现¨o，随后miRNA的研究较长；微列阵法无法区分前体和成熟miRNA，且识 获得长足发展．在最新发布的miRNA数据库(Re—别特异性不高，需进一步验证；Taqman探针法是 lease 15)中，共有133个物种的15000多个成熟 目前比较常用的方法，但由于其成本过高，不利于 高通量大规模的检测．硫是莱茵衣藻生命活动的必 miRNA被报道注册”J．莱茵衣藻是一种单细胞真核 M 模式生物，具有良好的遗传学基础．Schroda需元素之一，缺硫会引起莱茵衣藻一系列的生理生 等[4J报道莱茵衣藻基因组可编码3个Dicer—like蛋化变化，特别是近期研究发现，缺硫胁迫能导致绿 白和至少2个AGO蛋白，它们是RNAi机制中RNA藻细胞连续产氢能力大大增强¨…，使缺硫胁迫下 tom· 诱导的沉默复合物(RNA—induced 莱茵衣藻miRNA的调控成为研究热点．本研究利 silencing plex，RISC)中的主要蛋白，这表明在莱茵衣藻中 A Tao等口。和Molnar缺硫胁迫相关的莱茵衣藻miRNA进行检测，并对 存在多个小RNA途径．ZHAO 其相关靶基因进行分析，为进一步开展莱茵衣藻在 等【6o于2007年首次在莱菌衣藻研究中发现单细胞 真核生物的miRNA，这两个实验小组分别报道并在缺硫胁迫下的miRNA功能研究打下坚实基础． miRNA数据库上注册了80余种莱菌衣藻miRNA． 1 但迄今为止，miRNA数据库中只有一小部分 实验 miRNA的功能得到解释．一方面是因为miRNA数 据库每天都在增大；另一方面是因为缺少一种高 1．1材料 效、简便的定