重组大肠杆菌细胞不对称还原4-氯乙酰乙酸乙酯合成(R)-(+)-4-氯-3-羟基丁酸乙酯.pdfVIP

第 卷 第 期 催 化 学 报 年 月 26 I I 2005 I I Vol . 26 No. I I ChineseJournal o Catal sisf y November 2005 文章编号： （ ） 研究论文： 0253-9837 2005 I I-0993-06 993 !998 重组大肠杆菌细胞不对称还原 氯乙酰乙酸乙酯合成 4- （ ）（ ） 氯 羟基丁酸乙酯 R - + -4- -3- 敬科举， 徐志南， 林建平， 岑沛霖 （浙江大学化学工程与生物工程学系，浙江杭州 3I0027 ） 摘要：从赭色掷孢酵母（ ）中克隆出 依赖型醛基还原酶基因，构建了重组大肠杆 S orobolom ces salmonicolor ZJU0I05 NADPH P y 菌 （ ），该工程菌可以高效地表达醛基还原酶 将重组细胞用于催化 氯乙酰乙酸乙酯不对称还 E.coli BL2I pET28-ALR0I05 . 4- 原，合成出具有光学活性的（ ）（ ） 氯 羟基丁酸乙酯 实验发现，在加入适量辅酶及辅酶再生酶的条件下，利用重组细 R - + -4- -3- . 胞催化还原反应可以获得比使用赭色掷孢酵母更高的转化率、产率和 值，得到了几乎是光学纯的（ ）（ ）型产物，从而解 ee R - + - 决了酵母细胞催化此类反应 值较低的问题 考察了辅酶及共底物的添加、底物和产物的浓度、 值、温度以及菌体密度等 ee . pH 因素对还原反应的影响. 结果表明，不对称还原反应必须在辅酶NADPH 和辅酶再生酶系及共底物葡萄糖的参与下进行；底 物和高浓度的产物对还原反应有一定的抑制作用；当pH !6 .0 时，反应的转化率及产率都显著降低；高密度重组细胞可以减 小底物的抑制作用. 关键词：重组细胞，大肠杆菌， （ ）菌株，醛基还原酶，生物催化， 氯乙酰乙酸乙酯，不对称还 E.coli BL2I pET28-ALR0I05 4- 原，（ ）（ ） 氯 羟基丁酸乙酯 R - + -4- -3- 中图分类号： ／ ／ 文献标识码： O643 @55 @78 A As mmetric re