丙型肝炎病毒非结构蛋白4B对肝癌细胞c-myc和p53蛋白表达的影响.pdfVIP

·短篇论著· 丙型肝炎病毒非结构蛋白4B对肝癌细胞c-myc 和p53蛋白表达的影响 杨春陈文王忠琼陈枫 【摘要】 诱导肝癌细胞中c-myc／p53失衡，促进细胞增殖，与肝癌发生有关。 [关键词] 病毒非结构蛋白质类；肝炎病毒属；肝肿瘤；肿瘤细胞，培养的；原癌基因蛋白质c．mye／生物合成；肿瘤抑制 蛋白质p53／生物合成 ：L 原发性肝癌是一种严重威胁人类健康的恶性肿 瘤，丙型肝炎病毒(HCV)感染，特别是HCVlb型感并保存。 染与原发性肝癌关系非常密切…。丙型肝炎非结 1．2 方法 ’ 构蛋白4B(HCV．NS4B)是HCV的一个非结构蛋 白，编码261氨基酸残基，是一个膜相关定位蛋白， 其功能到目前为止仍不十分清楚心1。相关研究显 37℃，5％C02培养，每2—3天换液一次。 示，NS4B蛋白在HCV感染细胞的恶性变中起重要 作用【3]。研究证实HCV-NS4B可通过增进细胞周白对照组(未转染的HepG2细胞)，空白载体组 cell 期素eyelinDl、增殖细胞核抗原(proliferating nuclear 个复孔。取对数生长期细胞，转染前一天消化，以 antigen，PCNA)表达，干扰肝细胞周期，促进 肝细胞增殖HJ，陈霞等口。发现HCV．NS4B可激活原 细胞生长达60—80％汇合，以1．5斗鲋Ixg配制质 癌基因如c-myc等在肝细胞的表达。提示 粒／脂质体混合物(DOSPER脂质体细胞转染试剂盒 HCV-NS4B在丙型肝炎致癌机制中可能起一定作 用。而关于HCVNS4B蛋白对原癌基因与抑癌基因购自德国Roche公司)，轻柔混合后室温静置15 在肝癌细胞表达影响的研究国内外少有报道。本研 rain，将混合物逐滴加入相应各孔，空白对照组加入 等体积无血清培养基。24h后加入800mg／IIll 究采用HCV．NS4B表达载体，利用脂质体转染技术 c,418(购自上海洳公司)筛选，待空白对照组 将NS4B导人肝癌细胞，检测其对c-mye和P53蛋 细胞全部死亡后，G418减量为200me／L维持筛选 白表达的影响，探讨HCV-NS4B可能的致癌作用。 l材料与方法 并传代培养。 1．1材料 细胞生长足量时，采用Trizol试剂(购自美国 1．1．1细胞株本实验于2012年3月至2012年9 月在泸州医学院附属医院中心实验室完成。人肝癌 细胞株HepG2由泸州医学院附属医院中心实验室引物进行逆转录。以逆转录产生的eDNA作为模 提供。 板，加入GoTaqDNA多聚酶、NS4B特异性的引物进 IX)I：10．3760／cma．J．issn．1008-1372．2013．08．016 7 CATGGCGTGGAGCAGTCCT5 3’， 反义链 基金项目：四川泸州医学院附属医院资助项目(09070) 作者单位：646000四川省泸州，泸州医学院附属医院消化内 科(杨春、王忠琼)，感染科(陈文)，感染科中心实验室(陈枫) 通信作者：陈文，Email：y400123321@163．c．om 产物用1％琼脂糖凝胶电泳鉴定是否转染成功。 万方数据 1．2