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钙卫蛋白（粪便）酶联免疫吸附分析试剂盒使用说明书 货号：K6930 【产品名称】 　　通用名称：钙卫蛋白（粪便）酶联免疫吸附分析试剂盒 　　英文名称：Calprotectin ELISA KIT（stool） 【包装规格】 96人份/盒 【预期用途】 粪便钙卫蛋白酶联免疫吸附分析试剂盒用于定量测定人粪便中钙卫蛋白（MRP 8/14）的含量。仅适用于体外诊断。 【概要说明】 钙卫蛋白又叫MRP8/14，L1，(p8,14)，p34。 构成钙卫蛋白异聚体的两种蛋白名称： S100A8，钙粒蛋白A，MRP8（移动抑制因子相关蛋白8型MRP14（移动抑制因子相关蛋白型12(8孔），置于一塑料框架中。 2. 标准品（STD，K6930ST） 以冻干品的形式提供5个不同浓度的钙卫蛋白标准品，其确切浓度为0,3.9,15.6,62.5,250ng/ml。2(5瓶。 3. 检测抗体（AB，K6930A2） 生物素标记的单克隆抗-钙卫蛋白（MRP 8/14）抗体浓缩液。1瓶，50(l。 4. 质控品（CTRL，K6930KO） 以冻干品的形式提供钙卫蛋白质控品，请参考所附数据表中质控的浓度范围。2瓶。 5. 酶结合物（CONJ，K6930K） 过氧化物酶偶联的抗生物素蛋白浓缩液。1瓶，50(l。 6. 底物溶液（SUB，K6930TMB） 可直接使用的四甲基联苯胺（TMB）底物溶液。1瓶，15 mL。 7. 终止液（H2SO4） 可直接使用。1瓶，7mL。 8. 浓缩冲洗液（WASHBUF 10x，K6930WP） 2瓶（100mL/瓶）。 9．浓缩提取液（EXBUF 2.5x, K6930EP） 2瓶（90mL/瓶）。 【储存条件及有效期】 收到本试剂盒后在2-8°C下保存。此条件下可稳定至包装盒上所标有效期。每次检测只准备所需试剂量。有效期结束前试剂盒最多能用4次。 体积少于100(l的试剂使用前离心以避免量上的损失。 稀释后的冲洗缓冲液2-8°C下可保存1个月。 稀释后的提取缓冲液2-8°C下可保存3个月。 复溶后的标准品和质控品2-8°C下可保存4周。 稀释后的抗体溶液和酶结合物不稳定，不可保存。 其他试剂2-8°C下可保存至有效期结束。 【适用仪器】 适用于具有450nm、620nm（或690nm）波长的所有全自动、半自动酶标仪。 【样本要求】 1．采用粪便样本。 尽管粪便中的钙卫蛋白保持稳定约6天，仍然建议将粪便样本于2-8°C下保存且不超过48小时。-20°C下可长期保存。允许将样本缓慢解冻（于2-8°C下过夜），分析前平衡至室温。 2．样本提取 1）建议使用粪便样本提取试剂盒，取100 mg粪便样本溶于5ml提取缓冲液中。 缓冲液体积恒量：5ml 稀释因子：1：50 2）或选择人工方法，称重80-120mg粪便样本，记下确切重量。 a. 向样本加入5ml缓冲液。 缓冲液体积恒量：5ml 稀释因子取决于样本量，使用多少样本量应考虑后面的计算。请参考下表中正确的稀释因子： 重量（mg） 稀释因子 重量（mg） 稀释因子 80 62.5 102 49.0 82 60.9 104 48.1 84 59.5 106 47.2 86 58.1 108 46.3 88 56.8 110 45.5 90 55.6 112 44.6 92 54.3 114 43.9 94 53.2 116 43.1 96 52.1 118 42.4 98 51.0 120 41.6 100 50 b. 每个样本所需缓冲液体积取决于样本量（见下表）。稀释因子保持1：50不变。 因此，对于所有样本来说，相同的稀释因子可应用于后面的结果评估。 重量（mg） 缓冲液体积（ml） 重量（mg） 缓冲液体积（ml） 80 4.0 102 5.1 82 4.1 104 5.2 84 4.2 106 5.3 86 4.3 108 5.4 88 4.4 110 5.5 90 4.5 112 5.6 92 4.6 114 5.7 94 4.7 116 5.8 96 4.8 118 5.9 98 4.9 120 6.0 100 5.0 混合粪便样本和缓冲液，于涡旋混合器上振荡至少30秒（取决于粪便硬度）。 移取1ml粪便悬浮液到EP管内，13000g条件下离心5分钟。 3．样本稀释 取样本提取上清液，用冲洗缓冲液以1：50比例稀释。例如：20(l上清液（稀释1）+980(l冲洗液=1：50（稀释2）。移取100(l稀释2的上清液用于检测分析。 (Poullis A et al. (2002) Aliment Pharmacol Thr 16:675-681) 【检验方法】 1．自备材料 1）双蒸水 2）实验用天平 3）高精度移