柠檬酸高产黑曲霉菌株选育与发酵新底物研究.pdfVIP

! ##$ 年% 月 重庆师范大学学报（自然科学版） ’() ##$ 第* 卷 第% 期 +,-(’. +/ 01+(234(2 5+-6’. 7(489-:4;（5’;,-’. =49(9 ?@4;4+( ） A+.) * 5+) % 柠檬酸高产黑曲霉菌株选育与发酵新底物研究! 赵! 琴，李! 红，魏婷婷，唐平华，韦! 伟 （重庆师范大学 生命科学学院，重庆B###BC ） 摘! 要：本研究利用!# $%’(() *’$% D=E) EF$ 作为对照菌株以废弃苹果榨汁为底物，设计了四因素四水平的正交实 验。在GHI ，温度E%J ，甲醇含量K ，发酵时间B@ 的最适条件下，黑曲霉的发酵最好。将土壤中分离培养获得的# 株黑曲霉，选出菌株透明圈相对较大的D%、D 、D* 、D%% 这B 株。在最适条件下，根据B 株菌发酵废弃苹果榨汁生产 柠檬酸的情况来进行复筛，得到菌株D ；进而对D 进行鉴定，初步确定所得菌株为黑曲霉。在最适条件下，D 发酵 废弃苹果榨汁其柠檬酸的产量为%) *EF 62L 6M ，经对D 进行N% 紫外诱变，筛选得到DO%。结果表明DO% 菌株柠 檬酸产量比其父本增加了EI) IK ，比对照菌株D=E) EF$ 增加了E$) *EK 。 关键词：黑曲霉；菌株；柠檬酸；发酵；诱变 中图分类号： PFEOEE%；N=#%) E 文献标识码：D! ! ! 文章编号：%ICO IIFE（##$ ）#%O ##CFO #B ! ! 柠檬酸是一种重要的有机酸，在食品、化工、医 四角、花园中的土壤，共采集%# 个样本。 药、建筑、印染、皮革、洗涤等行业都有广泛的用途。 （ ）对照菌株采用黑曲霉!# $%’(() *’$% D=E) 柠檬酸的工业生产通常采用黑曲霉进行的深层发酵 EF$ ，购自中国科学院菌种保藏中心。 法，原料以薯干和玉米为主［%］。# 世纪$# 年代后， （E ）分离菌种培养基为QRD 培养基；初筛培养 ［E ］ 随着工业的发展人们对含柠檬酸产品的需求增加， 基为K 淀粉查氏培养基 ；发酵培养基为废弃苹 ［B ］ 而黑曲霉菌株的产酸能力是制约柠檬酸生产能力的 果榨汁培养基 。 一个瓶颈。因此筛选获得高产柠檬酸的黑曲霉菌株 （ B ）主要试剂有：EO* 二硝基水杨酸、结晶酚、酒 具有重大意义。在原料方面，薯干和玉米的价格不 石酸钾钠（均为国产分析纯）。 断上涨，致使柠檬酸的生产成本提高，新的廉价原料 （* ）主要仪器有：54S+( ?## 显微镜，RO$# % 形 成为迫切解决的需求。### 年我国苹果的产量达 态学显微镜图象分析系统，C 型紫外分光光度计， 到#BE 万; ，废弃的大概有#K ［ ］。目前，废弃苹 组织捣粹机。 果大都作为垃圾或部分作为牲口饲料，其价值没有 %) 方法 得到充分的利用。 （ ［*OI ］ % ）菌株采样与分离纯化 ：取采样地表层以 本研究从上述两个目的出发，一方面从壤中分 下* T %# 6 的土壤以*## 6M 无菌锥形瓶封装。样 离纯化并选育高产柠檬酸的黑曲霉菌株，另一方面 本当天稀释使用，未用完的置B J 保存。 利用筛选得到的菌株发酵废弃苹果生产柠檬酸并摸 称取各种土壤样品% 2 ，分别装入有%## 6M 无 索其发酵的最适发酵条件，以期对柠檬酸的产量提 菌水和玻璃珠的三