禽流感病毒H5N1 血凝素基因和神经氨酸酶基因在大肠杆菌中的表达.pdfVIP

中国生物工程杂志 　Ch ina B iotechno logy, 20 10 , 30 ( 1) : 12 18 禽流感病毒 H5N1血凝素基因和神经氨酸酶基因 在大肠杆菌中的表达 1 1 1 1 1 2 3 2 1 邹淑梅 　于在江 　张 　烨 　辛 　丽 　陈永坤 　唐启慧 　陈禹保 　陈清轩 　舒跃龙 ( 1 中国疾病控制中心病毒病预防控制所 　北京 　100052　2 北京标凯科技有限公司　北京 　100094) ( 3 北京中亚国瑞生物经济研究所 　北京 　102206) ( ) 摘要 　目的:克隆、表达和鉴定禽流感病毒 H 5N 1血凝素基因 hem agglu tin in , HA 和神经氨酸酶基 ( ) 因 neu ram idina se,NA 序列 ,为制备抗体和基因工程疫苗打下基础 。方法 :在成功克隆禽流感病 毒 H 5N 1全长 HA 、NA 基因并测序的基础上 ,将部分基因序列克隆到表达载体 p ET32 a ( + )上 ,全 基因序列克隆到表达载体 p GEX4 T1上 ,构建了重组表达质粒 p ET32 a ( + ) /HA ( 49 ～1587bp ) 、 ( ) ( ) 4 p ET32 a + /NA 12 1～114 1bp 、p GEX T1 /HA 、p GEX4 T1/NA ,转化大肠杆菌 BL2 1 / ro setta, IPTG 2 + 诱导表达 ,利用 N i 亲和层析柱和 GSTra P4B 亲和层析柱对重组蛋 白进行纯化 , 并用 W e stern b lotting和 EL ISA 方法检测其抗原性 。结果 :重组蛋白在大肠杆菌中可以高效达 , SD SPA GE 显示 其相对分子质量与预计大小一致 ,蛋白纯度 占总蛋白的 90%以上 。EL ISA 和 W e stern b lotting实验 证实 ,重组蛋白具有 良好的抗原性 。结论 :成功克隆和表达了禽流感病毒 H 5N 1 HA 、NA 基因序 列 ,为禽流感病毒 H5N 1诊断试剂和疫苗的开发等进一步的研究奠定了基础 。 关键词 　禽流感病毒 H5N 1　血凝素 　神经氨酸酶 　克隆表达 中图分类号 　Q786 ( ) ) 　　禽流感 avian influenza 又名欧洲鸡瘟 、真性鸡瘟 , avian influenza, HPA I 是近几年来在许多国家流行 、给 是由正粘病毒科 A 型流感病毒引起的一种禽类感染和 家禽养殖业带来巨大经济损失 、而且威胁到人类的健 疾病综合征 [ 1 ] 。我国 《家畜家禽防疫条例 》和世界动物 康和安全的一种烈性传染病 [ 5 ] 。因此 ,有关 H5N 1生物 卫生组织将该病规定为 A 类烈性传染病 [ 2 ] 。其临床表 学特性 ,致病机理 ,诊断和预防的研究日益受到卫生防 现包括亚临床感染 、中轻度的呼吸系统疾病 、产蛋下降 疫人员的重视 。 和严重的致死性疾病 。高致病性禽流感 ( HPA I) 是由 　　血凝素 ( hem agglu lin in , HA ) 蛋白是流感病毒的主 特定亚型的禽流感病毒引起的禽类高度致死性传染 要表面糖蛋白, 占囊膜蛋白的 9