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摘要
摘 要
oleracea
花椰菜(BrassicaVar.botrytis)是十字花科芸薹属甘蓝种的一个变种,是一种营养
丰富、具有食疗保健功能的蔬菜,因而被国内外广泛种植。但该类蔬菜易受虫害,严重影响
了其品质和产量,害虫以鳞翅目的菜青虫(Pieris
目前广泛使用化学防治措施,但此方法费用昂贵且破坏环境。培育抗虫花椰菜品种是既经济
又较环保的途径之一。然而,花椰菜抗虫种质资源的匮乏,用传统育种方法很难培育抗虫花
椰菜品种。植物基因工程技术的发展,为创制抗虫花椰菜品种提供了一个崭新的途径。
Bt
crylBa3和Bt
crylla8基因是由本研究组自主分离克隆所得,经研究证明两者表达产
物均对小菜蛾具有高毒力,且与CryIAc和CD,IAb蛋白无交互抗性。因此为扩大杀虫谱、延
缓害虫抗性、培育抗虫新品种提供了良好的基因资源。
本研究利用根癌农杆菌方法将crylBa3和叼,,血8基因转入花椰菜中,并对获得的转化
植株进行了分子鉴定和生物活性检测。首先,用PCR鉴定了目的基因是否转入转化植株中,
之后挑取PCR阳性植株进行Southern
blot检测目的基因插入的拷贝数;利用Westemblot鉴
定方法检测目的蛋白是否在这些阳性植株中正确表达:通过室内叶片离体饲喂昆虫实验,检
测转基因植株分别对敏感小菜蛾和对CrylAc产生抗性的小菜蛾的抗性水平。其主要得到的
成果如下:
1.构建了含有crylBa3基因及双LR边界的植物表达载体pCslBa-LR
2.获得了4株转Bt
c砂』肠8基因的单拷贝转基因植株且目的蛋白均正确表达,饲喂敏感小
菜蛾实验结果表明其中1株为高抗级别,2株为抗性级别
3.获得了5株转Bt
crylBa3基因的PCR阳性植株,目前已鉴定出3株为单拷贝植株且目
的蛋白均正确表达,虫测结果表明其中2株对敏感小菜蛾和抗性小菜蛾均达到高抗级别
本次研究的创新点在于构建了含T-DNA双边界的植物高效表达载体,提高了获得无选
择标记的植株的概率,从而提高转基因作物的生物安全性;将crylBa3、cwJ肠8基因转入花
椰菜,获得了抗性转基因花椰菜植株,为培育持久抗性的抗虫花椰菜新品种奠定了基础。
关键词:花椰菜;Bt
crylBa3基因;Btcrylla8基因:农杆菌转化;抗虫
ABSTRACT
TransformationofCauliflowerwithBt and
crylBa3
Gene
crylla8
Abstract
oleracea totheBrassicawhichisa of
Cauliflower(Brassica
Var.botrytis)belongscrops variety
Brassicaoleracea.It alloverthe insectscan cause to
world,however
planted easily largedamage
it.Toa wereusedtocontrolthese are
largeextent,agrochemicalpesticides insects,butthey
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