玉米耐旱相关基因ZmHSP90-1和ZmMYB-R1的序列特征分析与功能验证.pdfVIP

摘要 曼詈皇詈皇鲁基皇皇皇鼍皇鼍!鼍皇暑詈皇詈暑詈鲁皇鼍!!!鼍皇量皇曼!鼍皇鼍皇曼皇曼!詈!鲁皇詈皇!詈!曼!!!詈皇鼍兰曼鼍曼皇鼍兰曼皇寡皇詈皇詈詈!暑曼詈曼皇 摘 要 干旱是长期以来影响全世界粮食产量的主要限制因素之一。预计世界人口在2050年将 会超过90亿，今后相当长的时间内人口和资源的矛盾会相当突出。随着近现代遗传学和分子 生物学的发展，采用基因工程培育优良的耐旱作物势在必行。挖掘耐旱基因进行序列和功能 分析，以期研究耐旱性分子机理，为创造耐旱新种质提供新基因资源，进而选育耐旱玉米等 作物。 玉米((ZeamaysL．)不仅是重要的粮食和饲料作物，也是重要的食品工业原料和能源植 物。近年来，国内玉米总产已经超过小麦，成为我国第二二大粮食作物。本研究以耐旱自交系 玉米为供试材料，结合本实验室在前期研究中获得的耐旱相关ESTs，分析筛选出一些胁迫应 答基因，并克隆了两个新的基因，即热激蛋白(heat-shock 和转录因子基因ZmMYB-R1。通过生物信息学分析、蛋自瞬时表达和实时荧光定量PCR初步 南芥中过量表达该基因分析目标基因的抗逆功能。本研究获得的主要研究成果如下： 条ESTs在数据库中找到了同源基因，大多数的基因与非生物胁迫及生物胁迫相关，发掘了 能找到匹配基因，待采用RACE等分子生物学手段进行基因全长克隆和生物学功能研究。 稻等多种物种的热激蛋白高度同源，与拟南芥的AtHSP90．1亲缘关系比较近，蛋白序列相似 性达到88．3％。蛋白瞬时表达显示ZmHSP90．1在细胞质表达。实时定量PCR分析显示， ZmHSP90．J基因的表达受多种非生物胁迫的诱导，且在不同胁迫处理下表达模式不同，但在 高温和高盐下的表达模式有些类似，推测在这两个胁迫条件下玉米植株所产生的应激反应中 可能存在通路。 3)构建了在拟南芥中过表达ZmHSP90一J基因的重组载体，采用农杆菌介导的花序浸染法 获得了数十个具有潮霉素抗性的阳性植株，经PCR检测及后续的筛选总共获得14个株系。 转ZmHSP90-1基因拟南芥种子萌发和根长受NaCl胁迫抑制，幼苗和成株期忍耐高温、干旱、 ABA、CaCl2的能力都有不同程度的提高，但是对NaCl胁迫各个株系表现并不一致。 的亲缘关系比较近。蛋白瞬时表达显示ZmMYB。R1在细胞核特异性表达，实时荧光定量PCR 结果表明ZmMYB-R1基因的表达，受到高温、高盐、ABA。、低温、干旱的诱导，且不同胁迫 处理下该基因的表达模式不同。构建了在拟南芥中过表达ZmMYB-R1基因的重组载体，采用 农杆菌介导的花序浸染法获得了42个阳性T1株系，待继续筛选获得纯合系进行生物。 关键词玉米；耐旱；转基因；ZmHSP90．』基因；ZmMYB-R1基因；功能分析 Abstract Characterizati(Characterizationandand Functional√姐 of Seq alvsis Droudht．tolerantGenes ZmHsP90．1andZm谢B—R1ln Maize Abstract isoneofthemain factorswhichare Drought influencetheworldfood limiting longly is the that world in2050willbeover9 production．Itpredicted population andresourcescanbea contradict