足细胞损伤在肾小球硬化中作用.pdf

童里五学傍士后话立 中文摘要 肾小球足细胞位于肾小球基底膜外侧，是肾小球滤过屏障重要组成部分。在 生理状态下，不仅足细胞参与了滤过屏障对蛋白质的选择性滤过的作用，而且还 参与维持肾小球毛细血管袢功能和结构的正常。在病理状态下：足细胞受损不仅 可导致蛋白尿的发生，而且还与肾小球硬化形成密切相关。早期大量的形态学证 据表明：足细胞的损伤在光镜下，表现为细胞的肥大、变性、脱落和细胞数的减 少，电镜表现为足突的融合等改变，而这些改变也是局灶性肾小球硬化(FSGS) 的早期病变。近来的研究证实：足细胞损伤是FSGS的始动环节。对于这些组织 形态学改变的原因及其形成机制目前国内、外的研究较多但所知甚少。由于肾小 球足细胞是终末分化的细胞，不具有增值、分化的特性，其脱落损伤具有不可逆 性，而且蛋白尿不仅是肾小球滤过屏障受损的标志，也是各种肾小球疾病患者肾 脏慢性失功的重要原因。在临床上所有原发和继发性肾小球疾病，包括特发性 FSGS，糖尿病肾病、狼疮性肾炎，IgA肾炎等均可表现为FSGS样的病理过程。 虽然FSGS病变逐渐进展的过程均伴有肾小球足细胞数目逐渐减少的病理过程， 但l肾小球硬化进展的速度和程度完全不同。因此，研究足细胞损伤的过程对于阐 明肾小球硬化和蛋白尿的发生机制具有重要的意义。 由于足细胞位于基底膜的外侧，其损伤后很可能脱落而进入尿液中。通过分 析尿液足细胞的损伤特点而了解足细胞损伤在肾小球硬化中的作用。为此，我们 在确定了尿液足细胞及其其它有形成份的方法后系统地研究了足细胞排泄的临床 特征。以期诠释足细胞损伤在肾小球疾病发生发展中的作用。 本研究由四部分组成： 研究一、尿沉渣定量分析方法的评价及影响因素研究 日的：探讨尿沉渣定量分析方法及其影响因素研究。方法：病人的入选：选择经 肾活检确诊的肾脏病患者以及肾移植患者共lO例，比较显微镜尿沉渣镜检染色定 本课题由中国博士后基金盗助(绽号8) 童里上学博士后铪盘 量计数板和尿沉渣自动定量测定仪(UF一100)对同一样本中管型和上皮细胞的检 测结果；细胞染色采用改良巴氏染色；尿液细胞碎片的采用流式碘化丙啶染色检 测。结果：流式细胞仪检测尿沉渣中的管型和上皮细胞较显微镜镜检结果分别增 液和患者尿液进行悬浮并在40c保存发现：随留置时间的延长，其上皮细胞数均 逐渐减少(PO．05)。同时伴有细胞碎片率均逐渐增加。在8h和16h，用病人尿 液处置的尿沉渣细胞碎片率均比HDF组高(PO．05)。在8h时，用正常人尿液 处置尿沉渣的细胞碎片率较病人尿液处置组显著减低(PO．05)。然而患者尿沉渣 丙酮、乙醇和多聚甲醛固定--20℃保存一周后进行PI染色，其细胞碎片率分别为： 率较低，丙酮和多聚甲醛均较高(PO．05)。结论：采用荧光流式细胞仪和显微镜 镜检定量计数对尿沉渣管型和上皮细胞的检测存在显著的差异。对尿沉渣管型和 细胞成分的显微镜定量和定性检测仍是主要确诊手段。患者尿液中存在更多损伤 细胞的因素。尿样本应根据检测要求的不同，采用不同的处理。 研究二、活足细胞脱落是肾小球损伤的方式 目的：探讨足细胞的体外培养和尿液足细胞排泄的临床意义。方法：①对患者或 正常健康人的尿沉渣进行细胞培养，结合细胞形态、生长行为和足细胞特异性单 其中男性46例，女性55例，平均年龄35．1±11．8(岁)，所有患者的诊断均经 病理证实。10例健康志愿者为正常对照；③足细胞排泄的定量采用尿沉渣涂片免 疫组化染色直接计数；④尿白蛋白／尿肌酐大于300(pg／mg)的肾小球肾炎患者定 义为活动性病变。结果：①肾脏病患者尿沉渣中均可培养出足细胞，而正常人未 能培养出足细胞。肾脏病患者足细胞培养的成功率和尿沉渣中尿液细胞 podocalyxin免疫组化染色阳性率均较健康人对照组高，但各种肾小球肾炎患者 之间podocalyxin免疫组化染色阳性率并未有明显的差异；②活动性微小病变性 复里太孝博士后论立 ‘肾炎，局灶节段性肾小球硬化和IgA肾炎患者其尿液足细胞排泄计数和占尿液小 化染色阳性患者的24h蛋白尿和尿液上皮细胞排泄较阴性组患者均明显增加，血 浆总蛋白和白蛋白水平显著下降，但在年龄、性别和高血压发生率以及SCr、血 红蛋白、胆固醇和甘油三酯水平二者均无明显差异(PO．05)；④微小病变型肾小 结论：尿液脱落细胞中可以培养出足细胞，脱落的‘肾