积雪草甙预防隆乳术后包膜挛缩的细胞及分子机制初探.pdfVIP

积雪草甙预防隆乳术后包膜挛缩的细胞及分子机制初探 戴霞 李喆 刘剑毅 李世荣 毋巨龙 第三军医大学附属西南医院整形美容科，重庆 400038 [摘要] 目的：初步探讨积雪草甙抑制隆乳术后包膜挛缩的细胞及分子学机制。方法：人体 来源挛缩包膜组织进行体外分离培养，获得成纤维细胞，将含不同浓度积雪草甙的条件培养 基作用于细胞后，采用3 3 H-胸腺嘧啶核苷掺入法、H-脯氨酸掺入法、Western-blot 法分别检 测细胞增殖、胶原合成及α-SMA 蛋白表达的变化。结果采用SPSS11.0 统计学软件分析，并 进行t 检验。结果：当积雪草甙浓度达到50 mg/L 即对细胞DNA 合成及胶原合成产生显著 的抑制，抑制率分别为 34.7%和 30.1%，与空白组比较差异具有统计学意义（P0.05 ），随 着药物浓度的增加，抑制作用逐渐增强；积雪草甙浓度达到25 mg/L 时，α-SMA 蛋白表达 显著受到抑制，蛋白活化指数为1.673，与空白组比较差异具有统计学意义（P0.05 ）。抑制 作用与药物浓度正相关。结论：积雪草甙能有效抑制包膜来源成纤维细胞的增殖、胶原合成 及向肌成纤维细胞的转分化。 [关键词] 积雪草甙；硅凝胶乳房植入术；乳房假体包膜挛缩; 成纤维细胞 积雪草苷是从中药积雪草中提取的主要单体成分，具有抗抑郁、抗肿瘤、抗肾纤维化等 多种药理作用。在前期动物实验中，我们发现积雪草甙能有效抑制大鼠皮下埋植硅胶片周围 包膜的增厚，降低包膜内成纤维细胞的密度 。在此基础上，我们从细胞及分子水平对积雪 草甙抗包膜挛缩的作用机制作进一步探讨。 1 材料和方法 1.1 主要试剂：积雪草甙（化学纯，广西昌州天然产物开发有限公司）；DMEM高糖培 3 3 3 养基、胎牛血清（美国Gibco公司）；H-胸腺嘧啶核苷( H-TdR) 、H-脯氨酸（中国原子能科 学研究院）；兔抗人α-SMA抗体、HRP标记羊抗兔IgG (北京中杉金桥生物技术有限公司) 。 1.2 实验材料：挛缩的包膜组织来源于第三军医大学附属西南医院整形外科13例因硅凝 胶假体植入术后发生包膜挛缩，需手术治疗的女性患者，Backer分级III～IV级，病程3～8 个月，年龄26～37岁，经患者知情同意。术中自乳晕切口或乳房下皱襞切口切开包膜组织， 完整取出乳房假体后，于包膜增生最明显处切取2 cm×2 cm左右组织块，剪除附着的腺体或 脂肪组织，采用胰酶消化法行成纤维细胞培养。实验用第3～5代细胞。 3 4 1.3 H-TdR 掺入法测定DNA 合成：传代细胞以每孔2×10 接种于96孔板, 每孔加含 10%FBS的DMEM 培养液, 培养24 h 后换无血清培养基同步化细胞24 h ，弃上清，用含 10%FBS-DMEM（空白对照组）及含不同浓度积雪草甙(5 mg/L，25 mg/L ，50 mg/L，100 mg/L， 200 mg/L) 的条件培养基培养24 h ，积雪草甙浓度剂量分组参考文献。将3H -TdR (9925 Tbq/nmol)加入培养液，终浓度达740 KBq/ml, 继续培养4 h 。后用质量浓度为2.5% 的胰蛋白 酶消化并转移至玻璃纤维滤纸上, 依次用等渗盐水、 体积分数10%的三氯醋酸、无水乙醇 冲洗，固定, 干燥后加闪烁液, 用Beckman液闪计数仪测定。每次实验各药浓度做13个重复 样品。 3 4 1.4 H-脯氨酸掺入法测定细胞胶原蛋白合成：成纤维细胞10 /孔，接种于24孔培养板， 静置48 h ，弃上清，加无血清培养基冲洗3次，加入含不同浓度积雪草甙的条件培养基200 µl ， 3H-脯氨酸1.85×1010