体外抗真菌药敏实验的进展与展望.docVIP

体外抗真菌药敏实验的进展与展望 近年来，随着肿瘤化疗、器官移植、广谱抗生紊的广泛应用及}Ⅱv的感染的增多，真菌感染的发病率和死亡率在不断升。虽然多种抗真菌药物相继问世，绐真菌病治疗带来了新的转机，但目前关于耐药现象的报道也逐渐增多，因此，无论是对于新抗真菌药物的开发，还是台理地指导临床用药、监控耐药菌株的发生，都迫切需要建立一种准确性高、重复性好的体外抗真菌药敏试验方法。美国国家临床实验标准委员会(NCCIS)于1992年、1995年相继推出了药敏试验方案M27一P、M27一T(全称“酵母菌的液基稀释法抗真菌药物敏感试验方案”)，使医学真菌的药敏试验研究取得了明显进展，此方案具有准确性较高、重复性较好的特点，被众多实验室广泛使用，同时也发现了其本身的不足，于是，在完善^凹一T的基础上，NCcIs于1997年6月公布了药敏试验的标准方案M27一A 】。本文拟就近年来体外抗真菌药敏试验的进展和展望作一综述=1 N27一A方案的新内容虽然，N27一P和N27一T方案的应用为体外药敏实验的发展提供了良好的参照，但是，它们本身又存在着许多不足如：药敏方案的应用在检测药物和受试菌种方面尚受一定限制：对ArnH的耐药菌株的监测不足；新生隐球菌在RPMl一1640培养基生长不良；唑类药物终点判读的准确性还需要完善等=根据大量的实验结果，NCCLS推荐的眦 一A，从一定程度上丰富了上述内容。 1．1 抗真菌药物的种类及范围测试药 物包括：氟康唑(F皿)、5一氟胞嘧嚏(5一咒)、酮康唑(KCZ)、伊曲康唑(XCZ)和二性霉紊B(AmB)，药物所取的测试范围应该包括质控和参考菌株的MIC值在内，水溶性药物FCZ为0．125—64 ， 、5一FC为0．125—64~gtml；脂溶性药物KCZ为0．0313—16腭， 、ICZ 0．0313—16 ／ 和AraB0 0313～16N／ml；方案要求：常用的a r．a JI婀SkinDis．Dee l999．Vol l5，N0 4脂溶性药物的溶剂DMSO在最终容积的浓度不能超过1％，因为浓度过高可抑制真菌活性，所 ，脂溶性药物需采用DNSO 溶解，液体培养基稀释。 1．2 培养基配制更加严格 通常情况下，应用RPNI一1640培养基：将RPNI一1640粉末10．4 g溶于900ml蒸馏水中，加34．53g MOPS 至终浓度为0．165moFL，直至其溶解：搅拌过程中，应用1moFL NaOH调整其pH至7 0(25℃)，定容至1．oL，滤过灭菌，存于4℃备用。特殊情况下，选用特定培养基，(1)监测AraB耐药菌株的实验中，选用抗菌液基3号，即Pem,ssay液基。(2)在隐球菌的药敏实验中，选用酵母氮源培养基(YNB)培养基。(3)在终点判读困难的实验中，培养基中加人2％葡萄糖有助于增加终点判读的准确性。 1．3 推选优质质控菌株M27一A方案的质控及参考菌株MIC值( )分布范围见表1。药敏实验应该 质控、参考菌株为判定标准，质控、参考菌株的MIC值应处于药物受试浓度范围的中心；在连续进行的实验中，允许质控、参考菌株的MIC值有二个稀释度差异；质控、参考菌株应该向ATCC或具有菌种保藏能力的机构购买。1．4 明确规定抗真菌药物的敏感、耐药数值范围详见表2。 上述数值中，FCZ与ICZ的数值取自 于粘膜念珠菌感染的临床资料，5一FC取自于药代动力学的研究结果，从某种程度 上，对临床治疗有一定指导作用，但是，它的使用有一定局限性．而且敏感、耐药 值也不是绝对不变的。对于FCZ，MIC值4 或8 V#,-1均可能是它的敏感值，而克柔念珠菌、光滑念球菌对FCZ有先天耐药的特性，不适应于上述的FCZ的敏感、耐药数值；同样，对于I盘，其敏感、耐药数值仅适合粘膜念珠菌感染的治疗，而侵袭性念珠菌病的敏感、耐药数值尚未确定。方案确定，对于AmB，当MIC值大于1 时，就可作为判断AraB耐药菌株的指标。表2 抗真菌药物的敏感、耐药数值(飓fTId)注： S：敏感SDD：剂量依帻敏感I：临界性耐药R：耐药M27一A的公布，进一步推动了酵母菌、隐球菌对5种抗真菌药物的药敏实验的发展，但是不少作者认为它还有待于进一步完善。A an等认为孵育时间由48小时改为24小时，有利于提高多量法和微量法的一致性，有助于药敏实验与临床疗效确切关系的建立陋 ；W]lite等认为各药物敏感、耐药数值不是绝对不变的，而且有使用局限性，F皿数值仅适于指导念球菌病的治疗，ICZ则适于粘膜念珠菌病 a矧；Samfi等在实验中分别应用了抗菌液基3号和YNH培养基，其实验结果与NCCIS药敏方案取得了高度的一致性，抗菌液基3号可增加AmB耐药株的监测而YNB培养基则弥补了RPMI一1640培养表1 质控和参考菌株MIC值( )分布范围基的不足，如：隐球