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《发酵工程》实验课教学 实验目的、实验内容、实验要求 微生物酶制剂 蛋白水解酶 碳水化合物水解酶 碱性蛋白酶 淀粉酶 中性蛋白酶 异构酶 凝乳酶 果胶酶 脂肪酶 微生物菌株 筛选适合工业生产特定酶的微生物,包括所需 菌种的富集和酶生产水平的粗略分析等方法, 只有这样,才能快速检测大量野生菌株和突变 菌株。其中的许多酶是由微生物分泌的胞外 酶。 微生物酶 现在部分纯化或纯化的微生物酶主要用于葡 萄糖和果葡糖浆、洗衣粉和洗涤剂添加剂、 以及纺织品生产等领域。大规模应用的细菌 和真菌酶制剂的工业生产过程,所有的都是有 关生物多聚物-多糖或多肽的水解应用。 实验课安排 验证性实验 实验一～实验七 设计性实验 实验八 综合性实验 实验九 知识拓展 小型模拟发酵罐的演示试验 实验课成绩 5分制 实验理论课作业 实验课出勤 实验操作 实验课预习 实验考试 实验报告 实验内容 实验一 利用固体平板筛选产淀粉酶和蛋白酶的菌株 实验二 产酶菌株的大分子物质的水解实验 实验三 产淀粉酶菌株的发酵初筛 实验四 影响淀粉酶活力的因素 实验五 碳源对淀粉酶发酵活力的影响 实验六 测定碳源在发酵中的变化 实验七 测定氮源在发酵中的变化 实验八 产蛋白酶菌株的发酵和酶活力检测 实验九 蛋白酶抑制剂对产蛋白酶菌株酶活力的影响 实验一 利用固体平板筛选产淀粉酶和蛋白酶的菌株 实验目的 利用筛选培养基筛选产酶的细菌菌株 实验原理 在环境土壤中分布有产淀粉酶和蛋白酶 的菌株,筛选得到纯培养的细菌单菌落。 实验内容 1淀粉培养基的配制 2脱脂牛奶培养基的配制 3接种、培养、活性检测 实验二 产酶菌株的大分子物质的水解实验 实验目的 掌握进行细菌水解实验的原理和方法 实验原理 酶是微生物细胞代谢活动的的催化剂,目 前由工业生产的50多种酶制剂,多数是由微生物发酵 产生的。 实验内容 1配制油脂培养基 2配制尿素琼脂培养基 3配制明胶培养基 4接种、培养、活性检测 实验三 产淀粉酶菌株的发酵初筛 实验目的 学习用细菌发酵液测试酶特异性的方法 实验原理 在产酶培养基中发酵产酶菌株，按酶学反 应可检测出发酵液的酶活力。 实验内容 1产酶菌株发酵，培养温度、装瓶量、 发酵液的pH值,接种并发酵 2收集发酵液上清 3检测发酵液上清的淀粉酶活力 实验四 影响淀粉酶活力的因素 实验目的 了解pH和温度对淀粉酶活力的因素 实验原理 淀粉酶能水解淀粉生成糊精和葡萄糖, 用标准碘液检测出影响酶活性的因素。 实验内容 1配制发酵培养基,接种并发酵 2收集发酵液上清 3pH改变对淀粉酶活力的影响 4温度变化对淀粉酶活力的影响 实验五 碳源对淀粉酶发酵活力的影响 实验目的 了解不同碳源对细菌发酵的影响 实验原理 在发酵培养基中添加不同浓度的速效碳 源葡萄糖, 进行淀粉酶发酵。 实验内容 1配制含速效碳源发酵培养基,接种并发 酵 2收集发酵液上清 3检测发酵液上清的淀粉酶活力 实验六 测定碳源在发酵中的变化 实验目的 用分光光度法测定还原糖含量的原理与 方法 实验原理 在发酵过程中,定时从发酵液中取样,用 DNS法测定培养液中还原糖的含量。 实验内容 1配制含葡萄糖的发酵培养基,接种并发 酵 2收集发酵液上清 3测定还原糖含量 实验七 测定氮源在发酵中的变化 实验目的 用中性甲醛法测定氨基氮含量 实验原理 在淀粉酶的发酵过程中,定时从发酵液 中取样,用中性甲醛法测定氨基氮含量。 实验内容 1配制含硫酸铵的发酵培养基,接种并发 酵 2收集发酵液上清 3测定氨基氮的含量 实验八 产蛋白酶菌株的发酵和酶活力检测 实验目的 掌握蛋白酶的发酵及活性检测 实验原理 利用蛋白酶同酪蛋白底物反应前后,在 三氯乙酸中可溶物的紫外吸收增值, 来检测蛋白酶 活力高低。 实验内容 1配制蛋白酶发酵培养基,接种并发酵 2收集发酵液上清 3用紫外分光光度法测定蛋白酶活力 实验九 蛋白酶抑制剂对产蛋白酶菌株酶活力的影响 实验目的 检测蛋白酶抑制剂对蛋白酶活力的影响 实验原理 蛋白酶水解酪素生成酪氨酸，可检测产 酶菌株的活力及酶抑制剂的影响。 实验内容 1配制蛋白酶发酵培养基并发酵 2收集发酵液上清 3测定产酶菌株发酵液的蛋白酶活性 4确定蛋白酶抑制剂对酶活力的影响 实验课作业 1设计实验,说明如何检测由菌株A产生的胞内 淀粉酶,和由菌株B产生的分泌性淀粉酶? 2如何用两种方法来筛选出耐高温的蛋白酶产 生菌? * *