参芪补肺汤对肺气虚证慢性阻塞性肺疾病大鼠气道重构中MMP-9和TIMP-1蛋白表达的影响_临床医学论文.docVIP

参芪补肺汤对肺气虚证慢性阻塞性肺疾病大鼠气道重构中MMP-9和TIMP-1蛋白表达的影响_临床医学论文 参芪补肺汤对肺气虚证慢性阻塞性肺疾病大鼠气道重构中MMP-9和TIMP-1蛋白表达的影响_临床医学论文 作者：张葵,张樱,陈翌江,芦莉 【摘要】 目的 观察参芪补肺汤对肺气虚证慢性阻塞性肺疾病(COPD)大鼠气道重构中基质金属蛋白酶(MMPs)及其组织型金属蛋白酶抑制物(TIMPs)蛋白表达的影响。方法 用烟、二氧化硫定量熏吸并复合木瓜蛋白酶雾化吸入法,建立肺气虚证COPD大鼠模型。60只雄性Wistar大鼠随机分为正常组、模型组、补低组、补中组、补高组、激素组。半定量图像分析法测量小气道管壁和平滑肌层厚度；免疫组化法检测支气管肺组织MMP-9、TIMP-1的表达。结果 与正常组比较,模型组MMP-9和TIMP-1蛋白在支气管肺组织中高表达(0.01),小气道管壁及平滑肌层均显著增厚(0.01)。治疗后,与模型组比较,补高组、补中组和激素组MMP-9蛋白表达显著减少(0.01),激素组优于中药组(0.01)；补高组、补中组TIMP-1蛋白表达均显著减少(0.01)；补高组管壁及平滑肌层厚度显著降低(0.05)。结论 参芪补肺汤可抑制支气管肺组织MMP-9、TIMP-1蛋白表达,干预肺气虚证COPD大鼠气道重构。 【关键词】 参芪补肺汤；慢性阻塞性肺疾病；肺气虚证；气道重构；基质金属蛋白酶；大鼠 Key words：Shenqi Bufeitang；chronic obstructive pulmonary disease；lung-Qi deficiency syndrome；airway remodeling；metalloproteinase；rat 慢性阻塞性肺疾病(chronic obstructive pulmonary disease,COPD)是以不完全可逆性气流阻塞、气道慢性炎症和气道重构为特征的疾病。基质金属蛋白酶(MMPs)及其组织型金属蛋白酶抑制物(TIMPs)与气道炎症修复重构密切相关。中医认为肺气虚是COPD发生的首要条件,且贯穿疾病始终。参芪补肺汤从《永类钤方》中的补肺汤化裁而来,是治疗肺气虚证稳定期COPD患者的有效方剂。本研究拟通过观察参芪补肺汤对肺气虚证COPD大鼠肺组织中MMP-9、TIMP-1表达的影响,探讨其干预COPD肺气虚证大鼠气道重构的作用和机制。 　　1 实验材料 　　1.1 动物 清洁级雄性Wistar大鼠60只,体重180～200 g,购自重庆腾鑫生物技术有限公司(合格证号：0052543)。动物饲养室为清洁级,控制温度15～5 ℃。 　　1.2 药物与试剂 　　参芪补肺汤(由黄芪30 g、党参15 g、补骨脂10 g、丹参30 g、百部10 g、桑白皮10 g组成),贵阳中医学院第一附属医院药剂科提供,水煎2次浓缩为含原药材2 g/mL的药液。吸入用布地奈德混悬液,AstraZeneca公司产品,批号300229,购自贵阳医学院附属医院；木瓜蛋白酶,Sigma公司产品；兔抗MMP-9及TIMP-1多抗、即用型SABC免疫组化染色试剂盒均为武汉博士德公司产品；DAB显色试剂盒,北京中山公司产品。 　　1.3 主要仪器 超声雾化器,德国白瑞公司；自制透明塑料箱40 cm×40 cm×40 cm；RM 2016型轮转式石蜡切片机,上海徕卡仪器有限公司；BX51显微镜,日本Olympus。 　　2 实验方法 　　2.1 造模 采用《中医实验动物学》之“肺气虚证动物模型”复制法[1],并复合木瓜蛋白酶雾化吸入法[2]复制“肺气虚证”稳定期COPD模型大鼠。用刨花、锯末、烟叶各30～50 g,另加二氧化硫粉10 g,点燃烟熏,模型大鼠暴露于烟雾浓度300 ppm的烟室中,每日2次,每次1 h,并于造模开始后第30、32、34、36日将超声波雾化器与40 cm×40 cm×40 cm透明塑料箱相连,通过雾化管向箱中模型大鼠喷入浓度为0.3%的木瓜蛋白酶,每5只大鼠2 mL。造模期60 d。 　　2.2 分组与给药 　　Wistar大鼠随机分为6组,每组10只。正常组：置于正常无烟环境中饲养,不予处理。模型组：造模1月后开始生理盐水灌胃10 mL/(kg·d),同时雾化吸入生理盐水4 mL/d；补高组：造模1月后开始给参芪补肺汤水煎剂灌胃3.52 g/(100 g·d),相当于成人常规临床用量的4倍,同时雾化吸入生理盐水4 mL/d；补中组：造模1月后开始给参芪补肺汤水煎剂灌胃1.76 g/(100 g·d),相当于成人常规临床用量的2倍,同时雾化吸入生理盐水4 mL/d；补低组：造模1月后开始给参芪补肺汤水煎剂灌胃0.88 g/(100 g·d),相当于成人常规临床